【摘 要】
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目的检测2，3，7，8-四氯二苯二噁英(2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD)诱导的胎鼠腭裂模型中腭突组织细胞周期相关分子的表达变化，初步探讨细胞周期相关分子在腭裂发生中的作用机制。方法使用随机数字表法将48只C57BL/6 J孕鼠随机分为TCDD处理组与对照组，每组24只。TCDD处理组在胚胎日第10天(the embryonic day 10.5，E
【机 构】
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重庆医科大学附属儿童医院整形外科，儿童发育疾病研究教育部重点实验室，儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地，儿科学重庆市重点实验室 400014,重庆医科大学附属儿童医院整形外科，儿童发育疾病研究教育部
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目的检测2，3，7，8-四氯二苯二噁英(2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD)诱导的胎鼠腭裂模型中腭突组织细胞周期相关分子的表达变化，初步探讨细胞周期相关分子在腭裂发生中的作用机制。
方法使用随机数字表法将48只C57BL/6 J孕鼠随机分为TCDD处理组与对照组，每组24只。TCDD处理组在胚胎日第10天(the embryonic day 10.5，E10.5)，按28 μg/kg的量(含5 μg/ml TCDD的玉米油)给予孕鼠一次性灌胃，对照组等量玉米油灌胃。分别在E13.5、E14.5及E15.5取出各组胎鼠腭突组织，提取总核糖核酸和总蛋白，分别用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测细胞周期相关分子的信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平。以不同浓度TCDD(0.01、0.1、0.5和1 nmol/L)处理人肾胚293t细胞(HEK293t)，并用噻唑蓝(MTT)检测其细胞增殖活力。以IBM SPSS 24.0进行统计分析，两样本间均值比较均采用独立样本t检验，所有结果作K-S检验均符合正态分布，方差不齐者采用校正t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
结果E13.5、E14.5和E15.5，干扰素调节因子6(Irf6)蛋白在对照组(1.26 ± 0.13、1.67 ± 0.14、1.42 ± 0.15)较TCDD组(0.81 ± 0.08、1.04 ± 0.02、0.86 ± 0.12)表达水平高，差异有统计学意义(t＝2.836、3.662、2.867，P＝0.0471、0.0146、0.0241); E14.5和E15.5时细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1 A(P21)蛋白在对照组(2.26 ± 0.21、1.99 ± 0.21)较TCDD组(1.43 ± 0.12、0.93 ± 0.22)表达水平高，差异有统计学意义(t值为3.398、3.378, P值为0.8726、0.0273)。细胞周期相关分子的mRNA表达水平：各个时间点，细胞周期蛋白D1(cyclin D1)对照组(1.00±0.02、0.94±0.03、1.11±0.09)表达水平较TCDD组(0.28±0.01、0.33±0.06、0.88±0.01)高(t＝22.53、22.35、14.27，均P<0.001)；TCDD组cyclin E1、cyclin A2、cyclin B1、细胞周期蛋白依赖性激酶6(Cdk6)、Cdk2、Cdk1表达均较对照组高，差异有统计学意义(均P<0.05)，其中E13.5 cyclin B1和E15.5 Cdk2在2组间差异无统计学意义(均P>0.05)。0.1 nmol/L TCDD处理1、2、3 d，HEK293t细胞增殖活力(0.70 ± 0.05、1.05 ± 0.03、1.39 ± 0.04)均较对照组(0.49 ± 0.04、0.98 ± 0.03、1.55 ± 0.02)增加，差异有统计学意义(t＝2.829、1.395、2.692，P＝0.0198、0.1320、0.0247)。
结论TCDD下调Irf6和P21蛋白的表达水平，并干扰细胞周期相关分子正常表达，可能干扰了腭中缝上皮细胞退出细胞周期及增殖活力，细胞周期相关分子在腭发育过程中时空表达的紊乱可能与TCDD诱导腭裂的发生机制有关。
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