探讨核仁小分子RNA宿主基因5(small nucleolar RNA host gene,SNHG5)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的星形胶质细胞损伤的影响。
方法(1)体外培养星形胶质细胞,采用先缺氧培养6 h,再复氧培养18 h的方法建立H/R细胞模型,Lipofectamine™ 2000脂质体法进行细胞lncRNA SNHG5转染,RT-qPCR检测H/R细胞及转染后lncRNA SNHG5的表达情况。(2)星形胶质细胞分为正常对照组、模型组、转染对照组(转染pcDNA-NC至细胞后,再建H/R细胞模型)和转染组(转染pcDNA-lncRNA SNHG5至细胞后,再建H/R细胞模型),观察过表达lncRNA SNHG5对星形胶质细胞的影响。(3)将转染lncRNA SNHG5并进行H/R干预的星形胶质细胞分为转染 溶媒组(0.1%的DMSO孵育)和转染 抑制剂组(20 μmol/L的LY294002孵育),观察PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对H/R星形胶质细胞的影响。(4)CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中增殖蛋白(Cyclin D1、Cyclin E)、凋亡蛋白(Caspase-3、Bax)和p-PI3K、p-AKT的表达,ELISA检测细胞培养上清液中炎性因子IL-1β和TNF-α水平,比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。采用SPSS 22.0软件进行独立样本t检验和单因素方差分析,进一步两两比较用LSD-t检验。
结果(1)RT-qPCR结果显示,经H/R干预后,星形胶质细胞中的lncRNA SNHG5水平较正常培养细胞低(t=33.28,P