【摘 要】
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目的 探讨糖尿病大鼠皮肤组织和创面组织中蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路关键蛋白的表达变化,并探讨相关机制.方法 选取7～8周龄SD大鼠78只,按照随机数
【机 构】
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400042重庆,第三军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
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目的 探讨糖尿病大鼠皮肤组织和创面组织中蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路关键蛋白的表达变化,并探讨相关机制.方法 选取7～8周龄SD大鼠78只,按照随机数字表法分为糖尿病组和非糖尿病组,每组39只.糖尿病组大鼠一次性快速腹腔注射20 mg/mL链脲佐菌素液(65 mg/kg,采用柠檬酸缓冲液配制),建立糖尿病模型;非糖尿病组大鼠同法注射等量的柠檬酸缓冲液.于注射后1～8周2组每周各取3只大鼠,于背部切取约1.0 cm×1.0 cm的全层皮肤,行HE染色观测表皮厚度.注射后1周,2组各取15只大鼠同前取皮造成全层皮肤缺损,于伤后即刻及1、3、5、7 d每组各取3只大鼠处死,伤后即刻每只大鼠沿创缘切取1块皮肤组织、伤后1～7d每只大鼠切取创面组织,取一部分组织采用蛋白质印迹法检测皮肤组织及创面组织中的Akt、磷酸化Akt、mTOR、磷酸化mTOR的蛋白表达水平;取剩余组织行免疫荧光染色,观察皮肤组织及创面组织中的磷酸化Akt与波形蛋白表达.对数据行析因设计方差分析、多重t检验.结果 (1)注射后1、2周,2组大鼠表皮厚度相似(t值分别为0.25、1.33,P值均大于0.05);与非糖尿病组比较,注射后3周起糖尿病组大鼠表皮厚度明显变薄(t值为4.44～9.71,P＜0.05或P＜0.01).(2)与伤后即刻皮肤组织比较,非糖尿病组大鼠伤后1～7d创面组织Akt、磷酸化Akt、mTOR(伤后3d除外)及磷酸化mTOR蛋白表达水平明显升高,t值为3.75 ～ 21.44,P＜0.05或P＜0.01.与伤后即刻皮肤组织比较,糖尿病组大鼠伤后1～7d创面组织中Akt、mTOR蛋白表达水平(伤后1d mTOR除外)无明显变化(t值为0.03～ 2.32,P值均大于0.05);伤后1～7d创面组织中磷酸化Akt(伤后1d除外)、磷酸化mTOR蛋白表达水平均明显升高(t值为3.79 ～8.11,P＜0.05或P＜0.01).伤后即刻,2组大鼠皮肤组织中Akt蛋白表达水平相近(t=0.66,P＞0.05),但糖尿病组大鼠皮肤组织中磷酸化Akt蛋白表达水平(0.310 ±0.035)明显低于非糖尿病组(0.790±0.032,t=6.20,P＜0.05).与非糖尿病组大鼠比较,糖尿病组大鼠伤后即刻皮肤组织中mTOR和磷酸化mTOR蛋白表达水平及伤后1～7d创面组织中Akt、磷酸化Akt、mTOR和磷酸化mTOR蛋白表达水平均明显降低(t值为3.52 ～ 13.44,P＜0.05或P＜0.01).(3)与伤后即刻皮肤组织比较,2组大鼠伤后1～7d创面组织中磷酸化Akt、波形蛋白表达呈逐渐增强趋势,其中糖尿病组大鼠皮肤组织和创面组织中各指标的表达均明显弱于非糖尿病组.结论 创伤能刺激Akt/mTOR信号通路活化,上调关键蛋白表达;糖尿病皮肤组织和创面组织中该信号通路的活性低下可能是导致创面难愈的关键机制.
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