【摘 要】
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为获得免疫原性好的Ⅰ型猫疱疹病毒（FHV-1）gB截短蛋白和制备特异性的多克隆抗体，以用于检测gB蛋白的表达水平变化及FHV-1的血清学诊断技术研究。本试验截取gB 蛋白的优势抗原区并插入pET-30a载体，构建原核表达质粒pET-30a-gB，测序正确后转入BL21（DE3）感受态细胞进行诱导表达。通过亲和层析纯化蛋白，将获得的重组蛋白免疫6周龄雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体。采用固定病毒-稀释
【基金项目】
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上海市市级科技重大专项（ZD2021CY001）； 中央级公益性行业科院所基本科研业务费（2021JB08;2022JB01）；
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为获得免疫原性好的Ⅰ型猫疱疹病毒（FHV-1）gB截短蛋白和制备特异性的多克隆抗体，以用于检测gB蛋白的表达水平变化及FHV-1的血清学诊断技术研究。本试验截取gB 蛋白的优势抗原区并插入pET-30a载体，构建原核表达质粒pET-30a-gB，测序正确后转入BL21（DE3）感受态细胞进行诱导表达。通过亲和层析纯化蛋白，将获得的重组蛋白免疫6周龄雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体。采用固定病毒-稀释血清法测定多抗中和效价，使用FHV-1感染后的细胞样本进行间接免疫荧光和West-blotting检测其反应性和特异性。结果显示，成功构建了表达FHV-1 截短gB蛋白的重组质粒pET-30a-gB，在37℃ 诱导 8 h后主要以包涵体形式表达。中和试验结果显示，制备FHV-1 gB截短蛋白多克隆抗体中和效价为1∶48。间接免疫荧光和West-blotting试验结果表明，所制备多克隆抗体具有良好的反应性和特异性，可特异性检测到FHV-1感染细胞中的gB蛋白。结果表明，原核表达的gB截短重组蛋白具有良好的免疫原性，制备的多克隆抗体具有较高的中和效价以及较好的反应性和特异性，为进一步解析gB蛋白的生物学功能和建立FHV-1血清学诊断方法提供了生物材料保障。
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