探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR α)对D–氨基半乳糖(D–GalN)联合脂多糖诱导的小鼠急性肝衰竭(ALF)的作用与机制。
方法将C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为对照组、ALF组、WY14643组、3–MA＋WY14643组、对照小干扰RNA(siRNA)＋WY14643组、自噬相关基因ATG7 siRNA(siAtg7)＋WY14643组，每组8只。通过腹腔注射溶于生理盐水中的D–GalN(700 mg/kg)联合脂多糖(10 μg/kg)构建小鼠ALF模型。WY14643作为PPAR α的选择性激动剂于造模前2 h以6 mg/kg通过尾静脉注射；3–MA作为自噬抑制剂于造模前2 h以10 mg/kg通过尾静脉注射；siAtg7作为自噬抑制剂于造模前48 h以50 μmol·L–1·kg–1通过尾静脉注射；对照siRNA于造模前48 h以50 μmol·L–1·kg–1通过尾静脉注射。在D–GalN联合脂多糖注射造模后6 h麻醉小鼠取血，获取肝组织并迅速提取mRNA。组织病理学分析及血清转氨酶活性测定观察肝组织损伤的严重程度；实时定量PCR检测自噬相关基因ATG5、ATG7、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)及肿瘤坏死因子(TNF)–α、白细胞介素(IL)–1β、IL–6、趋化因子配体(CXCL)–1、CXCL–10的mRNA表达；蛋白质印迹检测自噬相关蛋白LC3、ATG5、ATG7、LAMP1的表达。
结果与ALF组相比，WY14643组小鼠肝小叶结构较完整，部分肝细胞呈气球样变，小叶内及汇管区炎细胞浸润不明显，血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平较低 [(486±56)比(2 705±423)U/L，(795±115)比(3 709±820)U/L，均P<0.05]，自噬相关基因LAMP1和蛋白表达更高(mRNA：4.28±0.57比2.67±0.43，P<0.05)；与WY14643组相比，3–MA＋WY14643组和siAtg7＋WY14643组肝细胞呈大片状坏死，肝索解离，肝小叶结构无法辨认，汇管区及坏死区可见大量中性粒细胞和淋巴细胞等炎细胞浸润，血清ALT、AST水平更高 [(2 563±576)、(2 148±221)U/L和(3 474±858)、(3 305±632)U/L，均P<0.05]，促炎性细胞因子TNF–α、IL–1β、IL–6及趋化因子CXCL–1、CXCL–10的mRNA表达更多(均P<0.05)。
结论PPAR α可通过促进细胞自噬减轻炎症反应对D–GalN联合脂多糖诱导的小鼠ALF产生保护作用，PPAR α可能成为临床上防治ALF的一个新的、重要的靶点。