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建立了测定大鼠血浆中 N6-羟苄腺苷的超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（ UPLC-QTOF-MS）分析方法，并应用于 N6-羟苄腺苷药代动力学研究。采用 Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（150 mm×3 mm，1.8μm）对目标物分离，以0.2％（ v／v）甲酸水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱；以6-苄氨基嘌呤作为内标，在电喷雾离子源正离子模式下进行定量分析。结果表明：N6-羟苄腺苷在0.625～160 ng／mL 的范围内线性关系良好（ r＞0.99）；方法的回收率在88