【摘 要】
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经同源性比较,链霉菌139（Streptomycessp.139）产生胞外多糖依博素的生物合成基因簇中ste19基因编码的蛋白Ste19与UDP葡萄糖4差向异构酶有较高同源性。将ste19基因克隆至质粒pET
【基金项目】
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国家“863计划”(2001AA21409)~~
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经同源性比较,链霉菌139（Streptomycessp.139）产生胞外多糖依博素的生物合成基因簇中ste19基因编码的蛋白Ste19与UDP葡萄糖4差向异构酶有较高同源性。将ste19基因克隆至质粒pET30a,在大肠杆菌BL21（DE3）中进行了异源表达。产生的可溶性Ste19重组蛋白,占细胞总蛋白的26%,说明该基因高GC含量（73.8%）及第三位碱基偏向使用GC（96.2%）并未影响其高效表达。SDSPAGE结果显示重组蛋白的分子量约37kD,与理论推测值基本相同。经亲和层析纯化后得到了较高纯度的重组蛋白,经HPLC分析纯度为92.9%。酶活性分析表明:Ste19蛋白可将UDP葡萄糖转化为UDP半乳糖,因此,Ste19蛋白是UDP葡萄糖4差向异构酶,它可能参与了依博素的生物合成。
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