【摘 要】
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目的观察褪黑素对人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法组织块法分离培养原代人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB),取第4代细胞分成4组:对照组、褪黑素(Melatonin)10-3 mmol/L组、褪黑素受体拮抗剂(Luzindole)1 mmol/L组、Luzindole 1 mmol/L+ Melatonin 10-3 mmol/L组,分组培养48 h,采用实时荧光定量
【机 构】
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510220广州,暨南大学医学院第四附属医院广州市红十字会医院广州市创伤外科研究所,510220广州,暨南大学医学院第四附属医院广州市红十字会医院烧伤科,510220广州,暨南大学医学院第四附属医院广
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目的观察褪黑素对人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。
方法组织块法分离培养原代人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB),取第4代细胞分成4组:对照组、褪黑素(Melatonin)10-3 mmol/L组、褪黑素受体拮抗剂(Luzindole)1 mmol/L组、Luzindole 1 mmol/L+ Melatonin 10-3 mmol/L组,分组培养48 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR, SYBR Green)检测细胞裂解液CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA表达;细胞爬片免疫荧光细胞化学方法分析CTGF、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)含量;酶联免疫吸咐试验(ELISA)法检测细胞培养液CTGF、COL-Ⅰ、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)含量。
结果10-3 mmol/L褪黑素降低增生性瘢痕成纤维细胞CTGF、α-SMA mRNA表达及CTGF、COL-Ⅰ的含量(P< 0.05),但COL-Ⅲ没影响。对照组、褪黑素组、Luzindole组、Luzindole+褪黑素组CTGF和α- SMA mRNA分别为0.129 4±0.006 1、0.086 9±0.003 1、0.123 5±0.008 1、0.123 2±0.009 4(F= 30.130,P< 0.01)和0.134 7±0.004 2、0.084 7±0.003 1、0.128 9±0.002 6、0.128 2±0.004 1(F= 168.500,P<0.01);CTGF和COL-I荧光细胞化学相对表达量为0.013 5±0.000 3、0.008 4±0.000 3、0.012 6±0.000 5、0.012 5±0.000 4 (F= 140.750,P< 0.01)和0.012 7±0.000 8、0.008 6±0.000 4、0.012 0±0.000 9、0.012 0± 0.000 8(F= 24.240,P< 0.01);CTGF和COL-I细胞培养液浓度(ng/L)为30.056 9±1.286 9、19.425 4±0.924 5、26.673 8±0.940 5、25.398 0±0.847 8(F=76.490,P< 0.01)和30.044 5± 1.157 5、21.798 5±1.126 0、26.516 8±1.292 3、25.459 4±1.705 7(F=25.650,P< 0.01);COL-Ⅲ细胞培养液浓度(ng/L)为47.141 4±3.532 6、53.498 2±4.589 9、52.532 5±5.239 8、46.427 1± 4.204 2(F=2.680,P<0.01)。
结论褪黑素通过与受体结合,下调增生性瘢痕成纤维细胞CTGF、α-SMA mRNA表达,从而降低CTGF、COL-Ⅰ的含量。
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