目的：构建人类基因组中16个组蛋白乙酰化酶的短发夹 RNA（shRNA）慢病毒载体文库，为进一步探索表观遗传学基因在 HBV 调控中的作用机制提供有利工具。方法根据 shRNA 引物设计原则，针对每个基因选择8对确保干扰效率的 shRNA 序列（A～H），将引物退火后连接至 shRNA空慢病毒载体上转化，PCR 法验证菌落克隆，确认阳性克隆；对质量合格的质粒再进行单切酶验证。分别将同一基因的4个 shRNA 慢病毒质粒混合，分别包装病毒。293T 细胞转染48 h 和72 h 后收集病毒粗液，感染 HepG2．2．15细胞。感染72 h 后用荧光显微镜观察并评估荧光细胞比例。结果针对16个乙酰化酶基因，构建128个慢病毒载体 RNA 干扰（RNAi）文库，72 h 后慢病毒感染 HepG2．2．15细胞的效率＞80％。结论成功构建16个组蛋白乙酰化酶的 shRNA 慢病毒载体，从而为研究人组蛋白乙酰化酶对 HBV 复制的影响奠定了坚实的基础。