【摘 要】
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为了构建一种能快速表达人EPO蛋白的真核表达系统,本研究运用的方法是构建基于TNF-α跨膜段(transmembrane,TM)的pcDNA3.1-TM-FactorXa-EPO真核表达载体。把构建好的载体瞬时
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为了构建一种能快速表达人EPO蛋白的真核表达系统,本研究运用的方法是构建基于TNF-α跨膜段(transmembrane,TM)的pcDNA3.1-TM-FactorXa-EPO真核表达载体。把构建好的载体瞬时转染CHO-K1细胞,用FactorXa消化TM-FactorXa-EPO融合蛋白,rhEPO从FactorXa位点处切割下来,达到高效表达和可控酶切。结果本研究构建的表达系统能高效快速表达人EPO。ELISA检测到转染24 h的细胞:经FactorXa酶消化总蛋白,rhEPO浓度为285.21μg/mL;经FactorXa酶消化胞外rhEPO,rhEPO浓度为298.65μg/mL。
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