【摘 要】
：
目的:构建cblN/Zap嵌合分子, 稳定转染Jurkat细胞后观察对细胞TCRζ的影响.方法: 提取Jurkat细胞的总RNA并反转录为cDNA, 以其作为模板用PCR方法扩增Zap基因的SH2片段.以含有
【机 构】
：
第四军医大学生物化学与分子生物学教研室,La Jolla变态反应与免疫学研究所
论文部分内容阅读
目的:构建cblN/Zap嵌合分子, 稳定转染Jurkat细胞后观察对细胞TCRζ的影响.方法: 提取Jurkat细胞的总RNA并反转录为cDNA, 以其作为模板用PCR方法扩增Zap基因的SH2片段.以含有人全长cbl cDNA的质粒pEFHAcbl作为模板扩增cbl基因的N-端(cblN), 并在其N末端带上含24 bp的flag标签.用重叠延伸PCR法, 在cblN基因内部的SH2两端引入BamH I和EcoR V酶切位点并克隆入pcDNA3.1(+)中.再以Zap基因的SH2置换cblN基因的SH2, 即成为pcDNA3.1(+)-cblN/Zap.酶切鉴定及测序正确后, 采用脂质体法稳定转染Jurkat细胞, 用RT-PCR和Western blot鉴定flag-cblN/Zap的表达, 用Western blot检测其对细胞TCRζ表达的影响.结果: 重组质粒pcDNA3.1(+)-flag-cblN/Zap经酶切后可产生与理论预期长度相符的片段.且测序证实其序列正确.脂质体法稳定转染Jurkat细胞后, 检测到目的基因在RNA和蛋白水平的表达.表达的cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ.结论: 重构嵌合分子cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ.
其他文献
调查表明,山西麦田杂草种类约75种,隶属于25科。以播娘蒿、荠菜、马齿苋、田旋花、藜和节节麦等为优势种群。出现频率最高的是播娘蒿,为61.2%,其次是荠菜,为52.6%。不同农田
针对泸州地区柑橘主要病虫为害特点,采取以螨治螨、灯光诱杀、生物农药防治、化学农药防治等综合措施防控柑橘上主要有害生物。达到了控害、增收、增益的良好效果。
In orde
利用中国农业大学李波等2008年筛选的5种糖醋液配方,以及何亮等对李波等配方进行扩展后的糖醋液对梨小食心虫、苹小卷蛾的诱蛾量结果,分析计算出了5种糖醋液的性价比及材料成
2008年9月汉刺蛾在河北省首次发现。此前尚未见有关汉刺蛾的报道。笔者经过4年多的观察和研究,初步掌握了汉刺蛾的形态识别特征,摸清了其生活规律及发生为害情况,并经试验探
探讨稻飞虱迁入初期成虫空间分布格局和抽样技术,为该害虫的准确抽样调查和有效防治提供依据。选取11块稻田逐丛调查资料,应用聚集度指标法、Iwao法和Talyor幂法则,研究了广
2011~2012年,针对南方水稻黑条矮缩病开展了水稻全生育期组合用药防病技术研究,得出防效较理想的湖南省中、晚稻用药方案:种子用25 g/L咯菌腈FS及350 g/L噻虫嗪FS进行消毒处
南方水稻黑条矮缩病是我国南方稻区重要水稻病毒病。通过研究,验证了60%吡虫啉FS 3.33 g/kg稻种处理能明显促进水稻成苗和生长,拌种14 d后稻株叶鞘中吡虫啉含量0.019 0 mg/kg
报道了采自云南的端足目异钩虾科沼泽宽肢钩虾1新属1新种,Eurypodogammarus helobius gen.nov.et sp.nov..宽肢钩虾属区别于其它属在躯体粗壮,每个基节鳃只有1个附鳃.文中详
植物细胞的生物力学,是探索生物生长奥妙的基础.本文阐述了国内外关于植物细胞生物力学的研究现状与进展;讨论了植物细胞力学分析的几个基本理论;重点讨论了植物细胞的力学模
企业核心竞争力的提升关系到企业的生存和发展,同时也对企业的市场竞争力的提升有着非常重要的作用,本文以江苏省为例,在对企业的核心竞争力进行相应研究的基础上,就如何提升