观察盐酸青藤碱(SH)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。
方法将胰腺癌CFPAC-1和PANC-1细胞株各分为3组。不使用SH处理的细胞为对照组,使用0.50 mmol/L和0.25 mmol/L浓度SH处理的细胞为实验组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测对细胞增殖能力的影响。伤口愈合和Transwell实验检测对细胞迁移及侵袭能力的影响。采用蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞中上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cad)、神经型钙黏蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vim)以及基质金属蛋白酶(MMPs)家族中MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平。应用Graphpad Prism 5.01统计软件分析,计量资料采用均值±标准差(Mean±SD)表示,组间采用独立样本t检验和单因素方差分析。
结果CCK-8实验CFPAC-1和PANC-1细胞0.50 mmol/L、0.25 mmol/L组分别与空白对照组比较,在24 h和48 h对细胞的增殖均产生了抑制作用,抑制率为(23.97±3.31)%比(11.35±3.06)%,t=2.796,P<0.05;(31.62±3.30)%比(15.71±3.12)%,t=3.496,P<0.05;(36.09±3.64)%比(20.96±3.58)%,t=2.949,P<0.05;(44.80±3.90)%比(20.65±3.53)%,t=4.586,P<0.05。细胞克隆形成实验CFPPAC-1和PANC-1 0.50 mmol/L、0.25 mmol/L组菌落数均低于空白对照组(13.67±0.88比49.33±2.33,t= 14.300,P<0.01;23.33±4.91比96.67±8.82,t=7.291,P<0.01;28.00±1.15比49.33±2.33,t=8.194,P<0.01;50.67±5.21比96.67±8.82,t=4.427,P<0.05)。伤痕愈合实验CFPPAC-1和PANC-1 0.50 mmol/L、0.25 mmol/L组迁移率均低于空白对照组[(25.33±1.63)%比(60.08±1.65)%,t=14.930,P<0.01,(37.55±2.69)%比(79.01±2.26)%,t=11.813,P<0.01,(42.49±2.05)%比(60.08±1.65)%,t=6.679,P<0.01,(51.67±2.36)%比(79.01±2.26)%,t=8.354,P<0.01)]。Transwell实验CFPPAC-1和PANC-1 0.50 mmol/L、0.25 mmol/L组透膜个数均低于空白对照组[(44.33±4.48)个比(122.30±5.04)个,t=11.561,P<0.01;(61.67±7.26)个比(172.70±3.71)个,t=13.610,P<0.01;(80.33±3.93)个比(122.30±5.04)个,t=6.568,P<0.01;(96.67±8.81)个比(172.70±3.71)个,t=7.943,P<0.01]。Western blot实验N-cad、Vim、MMP-2、MMP-9蛋白的表达量显著下降,而E-cad的蛋白表达量升高,这些变化和SH呈浓度依赖关系。
结论SH可通过抑制EMT来抑制胰腺癌CFPAC-1和PANC-1细胞的增殖、迁移和侵袭。