论文部分内容阅读
目的
观察缺氧环境对原代骨肉瘤细胞增殖的影响，以及用短发卡RNA(shRNA)沉默缺氧诱导因子(HIF)-1α基因后，缺氧状态下原代骨肉瘤细胞增殖的变化。
方法将原代骨肉瘤细胞分别置于缺氧环境(37 ℃、1%O2、5%CO2)或常氧环境(37 ℃、21%O2、5%CO2)下培养，采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期变化，Western blot检测HIF-1α蛋白表达水平。其次，将HIF-1α基因及阴性对照基因(SCR)对应的shRNA由慢病毒载体介导转染原代骨肉瘤细胞，分别记为HIF-1α/shRNA组和SCR/shRNA组，定量聚合酶链反应(qPCR)定量分析HIF-1α mRNA变化，Western blot检测转染后细胞HIF-1α蛋白表达变化。最后，转染后的细胞再次缺氧培养，采用MTT法检测细胞增殖。
结果细胞实验显示，缺氧环境可在一定时间(24 h)内抑制原代骨肉瘤细胞增殖，但随着缺氧时间延长抑制作用减弱，与常氧组比较，缺氧细胞12 h细胞增殖率减少30.5%，24 h减少25.0%。同时HIF-1α表达升高，表明肿瘤细胞增殖与HIF-1α之间明显相关。转染shRNA后，与空白对照组及SCR/shRNA组比较，HIF-1α/shRNA组的HIF-1α mRNA相对表达量明显降低(P＝0.000)，HIF-1α蛋白表达下降(P＝0.000)，缺氧培养的细胞增殖受到抑制。
结论shRNA介导的HIF-1α基因沉默可以有效逆转缺氧环境中HIF-1α对骨肉瘤细胞增殖的促进作用，从而可能干预肿瘤发育和生长的进程。