【摘 要】
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目的 探讨神经元素3(Ngn3)基因在人脐带间充质干细胞(hUMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的作用以及对肌腱膜纤维肿瘤基因同系物A(MafA)表达的影响.方法 组织块法分离培养并鉴
【机 构】
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贵州医科大学组织学与胚胎学教研室,贵阳550004;武汉大学医学研究院生物学专业,武汉430000
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目的 探讨神经元素3(Ngn3)基因在人脐带间充质干细胞(hUMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的作用以及对肌腱膜纤维肿瘤基因同系物A(MafA)表达的影响.方法 组织块法分离培养并鉴定hUMSCs;采用分阶段联合诱导法诱导hUMSCs向胰岛前体细胞分化,将其分为正常诱导组、基因沉默组、空病毒转染组,后两组在诱导第7天分别转染干扰病毒和空病毒,嘌呤霉素筛选后检测感染效果;21 d诱导结束后倒置相差显微镜和电子显微镜观察细胞形态变化;免疫细胞化学技术检测诱导后各组细胞胰岛素、胰高血糖素、Ngn3的表达;Real-timePCR、Western blotting检测Ngn3以及MafA的表达变化.结果 成功分离培养hUMSCs;分阶段联合诱导使正常诱导组和空病毒转染组细胞分化为胰岛前体细胞,Ngn3、胰岛素、胰高血糖素呈阳性表达,电子显微镜观察可见分泌颗粒;成功沉默了基因沉默组细胞的Ngn3基因,且该组细胞Ngn3、胰岛素、胰高血糖素呈阴性表达;Ngn3、MafA在基因沉默组明显下降(P＜0.05).结论 Ngn3基因沉默阻滞了hUMSCs向胰岛前体细胞的分化,并抑制了MafA的表达.
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