观察小干扰RNA(siRNAs)沉默DNA甲基转移酶(DNMTs)上调N-myc下游调节基因1(NDRG1)表达对前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响。
方法使用siRNAs分别抑制DU145细胞中DNMT1、DNMT3b及DNMT1＋DNMT3b的表达；使用Western blot、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中DNMT1、DNMT3b及NDRG1的表达改变；通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、Muse凋亡检测仪、划痕实验和Transwell侵袭实验，检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的改变；筛选上述改变最显著组DU145细胞，抑制细胞中NDRG1表达，再次检测上述细胞生物学行为。
结果Western blot及RT-qPCR结果显示，与对照组比较，DNMT1抑制组、DNMT3b抑制组及联合抑制组的NDRG1 mRNA(1.59±0.03，1.23±0.01，1.36±0.11比0.90±0.15，1.00±0.03)和蛋白(1.07±0.16，0.49±0.01，0.92±0.09比0.23±0.04，0.30±0.07)表达显著增加(P<0.05)。CCK-8结果显示，在24、48、72 h，DNMT1抑制组吸光度(A)值为0.189±0.030、0.266±0.048、0.419±0.058；DNMT3b抑制组为0.221±0.023、0.318±0.072、0.498±0.064；联合抑制组为0.199±0.021、0.284±0.062、0.488±0.091，与对照组比较，显著减少(P<0.05)。凋亡检测结果显示，DNMT1抑制组凋亡率为(22.40±1.36)%、DNMT3b抑制组为(14.20±0.80)%、联合抑制组为(17.60±0.74)%，与对照组比较，显著增加(P<0.05)。划痕实验结果显示，DNMT1抑制组划痕面积愈合率为(53.01±3.22)%、DNMT3b抑制组为(70.97±2.12)%、联合抑制组为(63.93±4.42)%，与对照组比较显著减少(P<0.05)。Transwell实验结果显示，DNMT1抑制组侵袭细胞数为(16±3)个、DNMT3b抑制组为(32±5)个、联合抑制组为(20±4)个，与对照组比较，显著减少(P<0.05)。其中，DNMT1抑制组效果最显著(P<0.05)，联合抑制未见显著协同效应。与对照组比较，NDRG1-siRNA可显著逆转由DNMT1-siRNA引起的DU145细胞生物学行为改变(P<0.05)。
结论通过抑制DNMT1、DNMT3b在前列腺癌DU145细胞中的表达，可部分恢复NDRG1的表达，并可显著抑制肿瘤细胞增殖，促进细胞凋亡，减弱细胞迁移及侵袭能力，其中单独抑制DNMT1效果最显著，联合抑制无明显协同效应，提示DNMT1可以成为前列腺癌去甲基化治疗的一个有效靶点。