人类NKX2.5基因(NK2 homeobox 5,NKX2.5)提前终止密码子(Premature termination codon,PTC)突变会引起房间隔缺损、房室传导阻滞等先天性心脏病。目前,已报道的NKX2.5 PTC突变有8个(E109X、Q149X、Q170X、Q187X、Q198X、Y256X、Y259X和C264X)。为了检测t RNA抑制子是否对PTC突变诱导通读产生有功能的全长蛋白,文章将8个NKX2.5 PTC突变克隆到pc DNA3.1(-)载体,将NKX2.5全长和E109X、Q149X及C264X克隆到p EGFP-N1载体,形成NKX2.5-EGFP融合质粒。将NKX2.5-EGFP与对应的t RNA抑制子质粒分别或共转染后观察绿色荧光数量定性判断t RNA抑制子是否诱导通读。Western blotting检测通读后全长蛋白和截短蛋白表达并计算通读效率。Real-time PCR检测NKX2.5下游重要调控基因Cx43 m RNA的表达判断通读后蛋白功能。结果表明,文章成功构建了8个基于pc DNA3.1(-)的NKX2.5表达质粒、4个基于p EGFP-N1的质粒;t RNA抑制子t RNA am能有效通读Q149X、Q170X、Q187X和Q198X,且对后三者的通读效率均在50%以上;t RNA op能有效通读C264X,通读效率约50%左右;t RNA oc不能通读NKX2.5 PTC突变;各通读后样本Cx43 m RNA相对表达量增加7%~41.7%;t RNA am和t RNA op能有效通读NKX2.5 PTC突变,产生具有功能的全长蛋白,但t RNA抑制子对细胞的其他影响还不明确,有待于进一步观察。