血小板/T细胞活化抗原1(PTA1)胞膜外区基因片段的克隆及其融合蛋白的表达

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuanreng
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的

克隆血小板/T细胞活化抗原1(platelet and T cell activation antigen 1,PTA1)胞膜外区基因片段,构建、表达、纯化PTA1胞膜外区与IgG Fc融合蛋白,用于PTA1配体鉴定的研究。

方法

针对人PTA1 cDNA设计引物,通过反转录、半套式PCR从TPA活化的Jurkat细胞中扩增PTA1胞膜外区基因片段,并进行序列测定,而后将其进一步克隆入融合蛋白表达载体pIG中,构建重组表达载体pPTA1/Ig,经DEAE-Dextran法转染COS-7细胞后通过亲和层析纯化,融合蛋白经SDS-PAGE、夹心ELISA及Western blot鉴定。

结果

获得793bp PTA1胞膜外区基因片段,构建成功PTA1/Ig融合蛋白表达载体,制备了可用于纯化PTA1/Ig的亲和层析柱,建立了检测融合蛋白的夹心ELISA方法。经SDS-PAGE、夹心ELISA及Western blot证实融合蛋白在COS-7细胞中获得表达,相对分子质量为83×103,表达效率约为1.3mg/L。

结论

PTA1/Ig融合表达载体构建及表达成功,获得的融合蛋白可以模拟天然的PTA1分子,为PTA1配体的鉴定提供了有力的工具。

其他文献
又到期末考试季,有网友篡改了苏大学士的“《江城子·乙卯正月二十日夜记梦》,帖子一出,引来评论无数。都说评论比正文有看点,各位同学,你们觉得呢?  《江城子·乙卯正月二十日夜记梦》原文:十年生死两茫茫,不思量,自难忘。千里孤坟,无处话凄凉。纵使相逢应不识,尘满面,鬓如霜。  夜来幽梦忽还乡,小轩窗,正梳妆。相顾无言,惟有泪千行。料得年年肠断处,明月夜,短松冈。  神改编一:一夜复习两茫茫,看一句,忘