为构建人类21号染色体特异DNA文库,以应用于人类遗传疾病的鉴定和研究,文章采用循环温度梯度法溶解释放微分离的人外周血细胞21号染色体DNA,将其进行简并寡核苷酸引物PCR(Degenerate oligo nu-cleotide primer-PCR,DOP-PCR)扩增后,利用100~500 bp和500~2 000 bp分段回收纯化的两种不同片段大小的DOP-PCR产物构建染色体特异DNA文库,并分别采用荧光原位杂交(Florescence in situ hybridization,FISH)和斑点杂交对DOP-PCR产物的来源和随机取样的文库克隆进行检测以评估所构建DNA文库的特异性。结果表明:循环温度梯度法能有效溶解释放微分离的21号染色体DNA;通过对DOP-PCR产物的分段回收纯化和克隆,增加了大片段DNA的连接效率;利用FISH技术和斑点杂交双重鉴定实验证明了文库的特异性,从而构建了21号染色体特异的DNA文库,并建立了构建染色体特异DNA文库及检测其特异性的方法,为21号染色相关遗传疾病的鉴定和研究奠定了基础。