目的 比较两种外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs) 采集方法 诱导的细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK) 扩增效率、细胞表型、杀伤肿瘤细胞的活性及其回输至肿瘤患者体内的免疫调节作用.方法 12例肿瘤患者共进行36次CIK 细胞体外诱导、扩增,其中6 例患者共18次扩增采用血细胞分离机采集PBMCs,另外6 例患者共18 次培养采用Ficoll 密度梯度分离50 mL 外周血方法 采集PBMCs.结果采用血细胞分离机或Ficoll 分离法采集PBMCs 经体外诱导获得CIK(分别为A-CIK 和F-CIK) 细胞数分别为7.47×109(3.7-13.6×109) 和6.37×109(3.8-11.8×109).培养至14 d 时,> 90%的A-CIK 和F-CIK细胞表型为CD3+,其中CD3+ CD56+,NKG2D+细胞及细胞内TH1 细胞因子均显著升高.效靶比为60:1 时,A-CIK和F-CIK 细胞对Daudi、K562 及293的杀伤活性分别为(49.1±17.8) %和(55.3±11.5) %、(67.6±24.1 %和(58.1±17.6) %、(36.4±11 %和(33.7±14.8) %.给肿瘤患者回输自体A-CIK 或F-CIK 细胞14 d 后,外周血中CD3+、CD8+及CD3+、CD56+细胞以及PBMCs 内IFN-γ均显著升高.结论 采集肿瘤患者50 mL 外周血分离的PBMCs 足以制备临床治疗使用的CIK 细胞.