【摘 要】
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目的:为了探讨使用基因治疗在体内分泌表达胰高血糖素样肽-1(GLP-1)方法治疗糖尿病的可行性,构建可分泌表达GLP-1的重组慢病毒。方法:1.将已构建成功的NT4-GLP-1融合基因插入
【机 构】
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深圳市龙岗中心医院介入影像科,北华大学,西安市华广生物工程有限公司
【基金项目】
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广东省科学技术厅项目(2005B36001082);深圳市科技和信息局项目(JH200505260306A)资助
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目的:为了探讨使用基因治疗在体内分泌表达胰高血糖素样肽-1(GLP-1)方法治疗糖尿病的可行性,构建可分泌表达GLP-1的重组慢病毒。方法:1.将已构建成功的NT4-GLP-1融合基因插入慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO中,构建pLenti6V5D-TOPO/NT4-GLP-1重组慢病毒包装质粒。2.用慢病毒包装辅助质粒plp1、plp2、plp/VSVG,及重组慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO/NT4-GLP-1,四质粒磷酸钙共沉淀法转染80%融合的293细胞系,包装慢病毒。3.通过免疫组化法染色确定重组慢病毒效应。结果:重组质粒经BamHⅠ和XhoⅠ联合酶切,10g/L琼脂糖凝胶电泳可见在342bp处有一目的片段。该值与NT4-GLP-1融合基因片段的大小一致,说明NT4-GLP-1融合基因已经成功重组于慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO内。免疫组化结果显示,实验组细胞内出现大量棕黄色颗粒,阳性细胞达到70%以上,对照组中没有阳性细胞,所以说明NT4-GLP-1重组慢病毒在细胞中可以正确地分泌表达GLP-1。结论:NT4-GLP-1重组慢病毒包装质粒构建正确,病毒包装成功。
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