【摘 要】
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目的:构建和转化脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究BDNF的功能及作用机制奠定基础.方法:用PCR扩增BDNF
【机 构】
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石河子大学新疆地方与民族高发病重点实验室,新疆,石河子,832002;复旦大学生命科学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室,上海,200433
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目的:构建和转化脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究BDNF的功能及作用机制奠定基础.方法:用PCR扩增BDNF基因cDNA中编码完整开放阅读框的基因片段;将该基因片段与plexA载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入EGY48(p8op-LacZ)酵母菌株.结果:成功构建pLexA-BDNF重组质粒.转化有重组质粒和pLexA空载体的两种EGY48(p8Op-LacZ)酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培养基中长成白色菌落(同时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落),但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培养基中生长,在SD/-His/-Ura液中培养16h后,OD600均值均为0.9±0.1.这表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,也没有酵母毒性作用.结论:构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选.
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