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目的 观察创伤性急性肺损伤(ALI)兔血清对肺微血管内皮细胞连接蛋白40(Cx40)表达和间隙连接通道(GJC)功能的影响,及后者与内皮细胞单层通透性的关系.方法 组织块贴壁法分离、培养兔肺微血管内皮细胞.细胞分为3组,对照组、创伤血清处理组和阻滞剂组.在阻滞剂组,细胞GJC阻滞剂1-庚醇(0.5 mmol/L)加入到培养液中.1 h后,阻滞剂组和创伤血清组的20%胎牛血清的培养液均被更换为含有20%创伤血清的培养液.对照组则只更换培养液.3组细胞继续孵育6 h后,进入实验观察.分别行划痕实验、Cx40蛋白免疫印迹、单层细胞通透性和细胞内Ca2+钙浓度检测.结果 Cx40蛋白印迹见创伤血清组与阻滞剂组蛋白表达水平较对照组有明显降低,且2组之间亦不同,阻滞剂组蛋白水平较创伤血清组低,吸光度和值减少(对照组726293.2±83 684.1,创伤血清组397 798.1±87 145.7,阻滞剂组316977.6±76 325.9,n=4,P＜0.05).3组细胞划痕边缘的细胞均被染料荧光黄(LY)染色,LY在对照组细胞扩散得最远,显色的周边细胞的数量最多,创伤血清组次之,阻滞剂组显色的细胞数量最少,相邻细胞与边缘细胞比值的差异有统计学意义(23±5、11±3比7±2,n=4,P＜0.05).3组细胞伊文思蓝清除率均随着时间的延长而增加,且3组细胞间亦有不同,阻滞剂组清除率高于创伤血清组和对照组.组间差异和时间点差异均有统计学意义(P＜0.05).通过共聚焦显微镜的观察,3组细胞荧光强度不相同,阻滞剂组荧光最强,对照组最弱.创伤血清组和阻滞剂组细胞内Ca2+浓度均显著高于对照组[(494.80±41.94)、(569.80±6.70)nmol/L比(158.80±13.09)nmol/L,P＜0.05].结论 创伤性ALI动物血清抑制肺微血管内皮细胞Cx40表达,进而引起GJC功能下降,导致肺血管内皮细胞单层通透性增加,该机制可能参与了胸部创伤后肺血管通透性增加的形成,促进了伤后急性肺损伤的发病.