【摘 要】
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目的 探究人乳头瘤病毒16 E7(HPV16 E7)通过调控细胞内miR-29a表达促进细胞增殖的分子机制,从miRNA的视角探讨高危型HPV的致癌机制.方法 将HPV16 E7基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(-),将重组质粒及空载质粒分别转染人前列腺癌细胞PC3;通过半定量RT-PCR检测细胞周期相关基因及miR-29a潜在靶基因CDK6、HBP1的表达水平,通过荧光素酶报告实验确定miR-29a的靶基因;将miR-29a mimic及inhibitor分别瞬时转染PC3-E7和PC3-3.1细
【机 构】
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三峡大学附属仁和医院妇产科,宜昌 443001;三峡大学肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室,宜昌 443002;三峡大学肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室,宜昌 443002;三峡大学附属仁和医院
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目的 探究人乳头瘤病毒16 E7(HPV16 E7)通过调控细胞内miR-29a表达促进细胞增殖的分子机制,从miRNA的视角探讨高危型HPV的致癌机制.方法 将HPV16 E7基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(-),将重组质粒及空载质粒分别转染人前列腺癌细胞PC3;通过半定量RT-PCR检测细胞周期相关基因及miR-29a潜在靶基因CDK6、HBP1的表达水平,通过荧光素酶报告实验确定miR-29a的靶基因;将miR-29a mimic及inhibitor分别瞬时转染PC3-E7和PC3-3.1细胞,Western blot检测CDK6蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期分布.结果 与对照组相比,克隆细胞株PC3-E7中CDK4、CDK6、Cyclin E2、E2F1等细胞周期相关调节因子及miR-29a的潜在靶基因HBP1、CDK6等表达均有不同程度的上调(均P<0.01);而PC3-E7细胞中CDK6蛋白表达水平亦明显高于对照组(P<0.01);miR-29a通过靶向3′-UTR区域调控CDK6基因转录和蛋白表达,E7高表达后下调了miR-29a的表达水平,使得CDK6表达升高,而加速细胞周期G1期向S期进展.上调miR-29a后可以抑制CDK6的表达,并调控下游细胞周期,部分逆转E7的促增殖效应.结论 miR-29a与CDK6 mRNA 3′UTR结合并下调其表达,从而抑制细胞的增殖,E7-miR-29a-CDK6信号通路可能是高危型HPV致细胞发生恶性增殖的重要途径.
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