【摘 要】
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目的 克隆大鼠脑组织中神经生长因子 (NGF) β亚基前体的全长序列 ,构建其真核表达载体 p EGFP-NGF。方法 采用 RT- PCR方法扩增 NGFβ亚基前体的全长序列 ,克隆入载体 p M
【机 构】
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昆明医学院,昆明医学院第一附属医院,昆明医学院第一附属医院
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目的 克隆大鼠脑组织中神经生长因子 (NGF) β亚基前体的全长序列 ,构建其真核表达载体 p EGFP-NGF。方法 采用 RT- PCR方法扩增 NGFβ亚基前体的全长序列 ,克隆入载体 p MD18- T,转化大肠杆菌 JM10 9,挑选白色菌落行酶切鉴定、PCR鉴定及序列分析 ;利用高保真 Taq酶自重组质粒 p MD18- T/ NGF中扩增目的基因NGF,将目的基因与真核表达载体 p EGFP- N1行双酶切 ,T4连接酶连接 ,转化大肠杆菌 DH- 5 α,挑选白色菌落行酶切鉴定。结果 p MD18- T/ NGF测序结果与 Gen Bank的序列完全一致 ,p EGFP- NGF行限制性内切酶 H ind 、Bam H 酶切 ,可见酶切片断与插入基因长度相符。结论 成功从大鼠脑组织中克隆神经生长因子 (NGF) β亚基前体的全长序列 ,并构建其真核表达载体 p EGFP- NGF,为从分子水平开展 NGF转基因相关研究奠定了基础。
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