【摘 要】
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目的 研究慢病毒介导下小RNA干扰组织蛋白酶B转染小鼠脑微血管内皮细胞( bEND.3)的最佳条件.方法 实验分3组,完全培养基组(NP组)、培养基±5 mg/L凝聚胺组(P1组)和培养基+8 m
【机 构】
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山西省眼科医院玻璃体视网膜科,山西医科大学解剖学教研室
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目的 研究慢病毒介导下小RNA干扰组织蛋白酶B转染小鼠脑微血管内皮细胞( bEND.3)的最佳条件.方法 实验分3组,完全培养基组(NP组)、培养基±5 mg/L凝聚胺组(P1组)和培养基+8 mg/L凝聚胺组(P2组),每组均有5个不同梯度的转染复数(MOI),即1、5、10、15、20,每个MOI值设3个孔,共45组.转染48、72、96 h分别在荧光显微镜下计数绿色荧光蛋白,并求其转染率,从而得到其最佳MOI值；1周后采用MTT法检测最佳MOI值对bEND.3活性和存活率的影响.结果 转染48 h时,在各组观察到少量绿色荧光蛋白,其转染率介于1％ ～9％；72 h和96 h时,MOI相同的各组间差异无统计学意义(P＞0.01),其中,MOI为1、5、15的各组转染率均低于20％；MOI为10和20组,转染率介于71％～97％与60％～ 84％,且MOI为10组转染率高于MOI为20组,差异有统计学意义(P＜0.01).MTT检测P1组和P2组存活率,1周时分别为(81.38 ±6.69)％、(62.03±5.13)％,P1组显著高于P2组(t=15.795,P＜0.001).结论 慢病毒介导的小RNA干扰组织蛋白酶B转染bEND.3最佳优化条件为MOI=10,凝聚胺为5 mg/L,最佳转染时间为转染后72 h.
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