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目的评估不同培养基及前处理方法在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对副溶血弧菌鉴定中的影响,并寻求最优化条件组合。方法收集副溶血弧菌40株,分别用血琼脂平板、TCBS琼脂平板和双洗琼脂平板进行培养;用直涂法、扩展法(直涂后裂解)和萃取(裂解、萃取后涂靶)法进行质谱前处理。用SAS软件建立不同培养基及前处理方法对该菌质谱检出率影响的logistic回归分析模型,并进行卡方检验统计分析。结果 "血琼脂平板+萃取法"条件组合检出率最高(100%鉴定到属,67.5%鉴定到种);在不使用血琼脂平板的前提下,"双洗琼脂平板+萃取法"条件组合检出率最高(70%鉴定到属,37.5%鉴定到种)。在"属"鉴定水平,前处理方法相同时,不同培养基的检出率差异有统计学意义(P<0.01);而培养基相同时,不同前处理方法的检出率差异无统计学意义(P>0.05);直涂法和扩展法相对萃取法的相对危险度(OR)分别为0.66和0.95,检出率差异无统计学意义(P>0.05);TCBS琼脂平板和双洗琼脂平板相对血琼脂平板的OR分别为0.06和0.10,对检出率差异有统计学意义(P<0.05),logistic回归方程Y=2.95-0.41a-0.05b-2.83c-2.35d(a:直涂法;b:扩展法;c:TCBS琼脂平板;d:双洗琼脂平板)。在"种"鉴定水平,采用扩展法或萃取法,不同培养基的检出率差异有统计学意义(P<0.05);采用血琼脂平板,不同前处理方法的检出率差异有统计学意义(P<0.01);直涂法和扩展法相对萃取法的OR分别为0.32和0.55,检出率差异有统计学意义(P<0.05);TCBS琼脂平板和双洗琼脂平板相对血琼脂平板的OR分别为0.18和0.49,检出率差异有统计学意义(P<0.05),logistic回归方程Y=0.20-1.15a-0.61b-1.72c-0.72d(a:直涂法;b:扩展法;c:TCBS琼脂平板;d:双洗琼脂平板)。结论欲提升副溶血弧菌MALDI-TOF MS鉴定效果,合适培养基的选择优于改善蛋白质提取的前处理操作。推荐萃取法作为常规前处理方法,培养基的选择建议依次为血琼脂平板、双洗琼脂平板和TCBS琼脂平板。