目的探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）分离、鉴定方法及其治疗难治性免疫性血小板减少症（ITP）的有效性及安全性。方法选取2016年12月—2017年7月西安高新医院收治的难治性ITP患者6例。脐带取自足月剖宫产健康产妇,采用酶消化法分离、培养hUC-MSCs,BD FACSCalibur流式细胞仪检测hUC-MSCs免疫表型,成骨、成脂诱导分化实验评估hUC-MSCs分化能力。6例患者均静脉输注hUC-MSCs（1×10⁶/kg）,输注后1个月如患者血小板计数≤50×10⁹/L可重复输注1次。所有患者至少随访3个月,随访截至2017-11-01,观察患者临床疗效、复发情况及治疗期间不良反应发生情况,并采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群表达情况。结果采用酶消化法分离、培养hUC-MSCs,可见原代细胞贴壁生长并逐渐融合成片状,形态均一,倒置相差显微镜下观察细胞类似于成纤维细胞,成长梭形流水状贴壁生长,细胞形态良好,并随着细胞传代,细胞形态未发生变化。流式细胞术检测结果显示,hUC-MSCs高表达CD₇₃、CD₉₀、CD₁₀₅,表达量均>98.0%;不表达或低表达CD₃、CD_11b、CD₁₉。成骨、成脂诱导分化实验结果显示,hUC-MSCs能向成骨细胞、脂肪细胞分化。输注hUC-MSCs后,6例患者完全反应3例,有效2例,无效1例,总有效率为5/6;随访期间复发1例,再次输注hUC-MSCs后仍有效。hUC-MSCs输注前后患者外周血CD₃⁺CD₄⁺T淋巴细胞比例、CD₃⁺CD₈⁺T淋巴细胞比例及CD⁺₁₉B淋巴细胞比例比较,差异无统计学意义（P>0.05）;hUC-MSCs输注后CD⁺₁₆CD⁺₅₆自然杀伤细胞（NK细胞）比例和CD₄⁺CD⁺₂₅CD^-₁₂₇辅助性T细胞（Treg细胞）比例均高于hUC-MSCs输注前（P<0.05）。本组患者治疗期间2例出现轻度发热,对症处理后完全缓解;1例患者出现激素依赖,经抗病毒治疗后痊愈。结论采用酶消化法能有效分离、培养hUC-MSCs,流式细胞术及成骨、成脂诱导分化实验能有效鉴定hUC-MSCs分化能力,且hUC-MSCs治疗难治性ITP的近期疗效较好,不良反应轻微,可能成为难治性ITP的新治疗方法。