【摘 要】
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目的:从独行菜中克隆萜类合成途径关键酶磷酸甲羟戊酸激酶(phosphomevalonate kinase,PMK)基因,进行序列分析和原核表达.
方法:根据独行菜转录组数据中LaPMK基因序列设计
【机 构】
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河南中医学院药学院郑州450046;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心郑州450046河南中医学院药学院郑州450046
【出 处】
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2015全国中医药生物化学与分子生物学年会
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目的:从独行菜中克隆萜类合成途径关键酶磷酸甲羟戊酸激酶(phosphomevalonate kinase,PMK)基因,进行序列分析和原核表达.
方法:根据独行菜转录组数据中LaPMK基因序列设计特异性引物,克隆得到LaPMK基因的开放阅读框(open reading frame,ORF),构建pET32a-LaPMK原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达LaPMK融合蛋白.
结果:LaPMK基因ORF全长为1518bp(Genbank注册号KT004541),编码505个氨基酸.生物信息学分析结果显示LaPMK蛋白没有跨膜区,不含信号肽,位于细胞质中,含有GHMP激酶家族特异的N末端和C末端的保守结构域.系统进化树结果显示LaPMK蛋白与芜菁的PMK蛋白具有92％的序列相似性,亲缘关系较近.构建pET32a-LaPMK原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达LaPMK融合蛋白.
结论:克隆了LaPMK基因,建立其稳定的原核表达体系,这为LaPMK蛋白纯化、抗体的制备,进一步研究LaPMK基因在独行菜萜类合成途径中的作用奠定了基础.
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