【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）牛磺酸上调基因1（taurine upregulated 1,TUG1）对人牙髓干细胞（human dental pulp stem cells,hDPSCs）增殖及成骨/牙本质向分化的影响。方法 分离培养hDPSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原CD44、CD45、CD73、CD90、CD133、STRO-1,碱性磷
【机 构】
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西南医科大学附属口腔医院口腔颌面外科
【基金项目】
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四川省科技计划项目（2018JY0399）； 泸州市人民政府-西南医科大学科技战略合作项目（2019LZXNYDJ15）； 西南医科大学校级科研项目（2019ZQN020）～～；
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目的 探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）牛磺酸上调基因1（taurine upregulated 1,TUG1）对人牙髓干细胞（human dental pulp stem cells,hDPSCs）增殖及成骨/牙本质向分化的影响。方法 分离培养hDPSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原CD44、CD45、CD73、CD90、CD133、STRO-1,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）和茜素红染色鉴定其分化能力。hDPSCs成骨诱导0、7、14 d收集RNA,qRT-PCR检测TUG1的表达水平。构建携带sh-TUG1的慢病毒载体pSLenti-U6-shRNA（TUG1）-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE,并通过感染hDPSCs及嘌呤霉素筛选建立稳定沉默TUG1的hDPSCs细胞系,CCK-8检测hDPSCs增殖能力,ALP和茜素红染色及定量检测hDPSCs的早期ALP活性和晚期矿化结节的形成,qRT-PCR和Western blot检测成牙本质及成骨分化相关的基因牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP）、牙本质基质蛋白-1（dentine matrix protein 1,DMP-1）、Runt相关转录因子2（runt-related transcription factor 2,Runx2）、骨钙素（osteocalcin,OCN）、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）基因及蛋白表达变化。结果 成功分离、培养和鉴定hDPSCs,hDPSCs成骨向分化过程中TUG1的表达明显增加（P＜0.05）。沉默TUG1后hDPSCs的增殖能力下降（P＜0.05）,ALP活性降低,矿化结节形成减少;成牙本质分化基因DSPP、DMP-1以及成骨分化基因Runx2、OCN、OPN表达也显著降低（P＜0.05）。结论 沉默TUG1可抑制hDPSCs的增殖及成骨/成牙本质分化。
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