目的 建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物抗Delta样蛋白3(DLL3)单抗-MPVP-PBD的质控方法.方法 本实验利用转基因细胞法,以转染了DLL3的HEK 293T细胞系为靶细胞测定抗DLL3单抗-MPVP-PBD的生物学活性;利用ELISA法测定结合活性;利用CE-SDS和SEC-UPLC测定大小异质性;利用iCIEF分析电荷异质性;分别利用HIC-HPLC和LC-MS对药物抗体偶联比(drug-to-antibody ratio,DAR)进行测定;利用RP-HPLC测定游离小分子药物含量.结果 抗DLL3单抗-MPVP-PBD的生物学活性EC5o平均值为(4.02±0.22)ng·mL-1,RSD为5.47％;结合活性EC5o平均值为(12.67±1.09) ng· mL-1,RSD为8.60％;非还原CE-SDS完整IgG峰面积百分比为(25.58±0.15)％、HHL为(36.56 ±0.24)％、轻链为(14.61 ±0.13)％等,RSD均小于2％;还原CE-SDS重链和轻链峰面积之和为(96.97±0.31)％,RSD为0.32％;SEC-UPLC主峰面积为(98.68 ±0.05)％,多聚体(1.32±0.05)％,RSD均小于5％;iCIEF主峰面积为(68.19 ±0.68)％,主峰等电点(8.28±0.01),RSD均小于2％;LC-MS测定DAR为2.08(完整相对分子质量水平)和1.73(轻重链水平);HIC-HPLC测定DAR为(1.86±0.03),0-药物为(19.49±0.28)％,1-药物为(11.21±0.20)％,2-药物为(48.64 ±0.68)％,3-药物为(5.21±0.40)％,4-药物为(15.44±1.19)％,RSD均小于10％;LC-MS测定了偶联位点占有率;RP-HPLC测定游离小分子药物为(23.20±0.82)％,RSD为3.53％.结论 本实验初步建立了抗体偶联药物抗DLL3单抗-MPVP-PBD的质控方法,该质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可作为其常规检测方法,为我国相关抗体偶联药物的质量检测提供了参考依据.