突变型大肠杆菌酒石酸脱氢酶β亚基基因的克隆表达与包涵体的复性

来源 :山东医学高等专科学校学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xx19890701
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目的利用生物工程相关技术,获得不含Cys的突变型大肠杆菌酒石酸脱氢酶β亚基,为下一步蛋白质交联奠定基础。方法利用PCR定点突变技术扩增目的基因,并将之克隆到质粒PGM—T,转化大肠杆菌DH5α。经测序证明序列无误后,将之与表达载体pTrcHisC连接,在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达。目的蛋白用TALON金属亲和树脂纯化,通过分步透析逐步去除变性剂的方法复性。结果通过SDS-PAGE分析,确定目的蛋白以包涵体形式存在。复性产率可达70%。结论此次实验所得到的目的蛋白的纯度与活性均满足蛋白质交联的需要
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