【摘 要】
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目的:构建人HCN4基因的真核表达质粒并转染人胚胎肾细胞,建立异源性表达HCN4通道模型。方法:通过聚合酶链反应扩增人HCN4基因全长核苷酸序列,双酶切(Xho I和EcoRI)后插入真核
【机 构】
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皖南医学院第一附属医院弋矶山医院心内科,皖南医学院活性生物大分子研究安徽省重点实验室,南京医科大学附属南京医院心内科,
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目的:构建人HCN4基因的真核表达质粒并转染人胚胎肾细胞,建立异源性表达HCN4通道模型。方法:通过聚合酶链反应扩增人HCN4基因全长核苷酸序列,双酶切(Xho I和EcoRI)后插入真核表达质粒p IRES2-EGFP中,构建重组真核表达质粒p IRES2-HCN4-EGFP。应用脂质体法将重组质粒p IRES2-HCN4-EGFP转染入HEK293细胞中进行表达。全细胞膜片钳技术检测HCN4通道电流。结果:酶切及测序的结果显示p IRES2-HCN4-EGFP构建成功,倒置荧光显微镜能观察到EGFP绿色荧光,反转录-聚合酶链反应检测到HCN4 mRNA表达,膜片钳检测到HCN4基因编码的通道电流。结论:成功建立异源性表达HCN4通道模型,为进一步研究HCN4通道电生理特性提供了实验基础。
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