汉坦病毒S片段标准品构建及在荧光定量PCR检测中的应用

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[目的]构建汉坦病毒s片段标准品,并建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量PCR方法检测汉坦病毒核酸。[方法]对76.118株的s片段基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针,逆转录为cDNA,经PCR扩增,产物纯化后与PMD18-TVector连接,、转化到大肠杆菌DH5ct,筛选得到标准品的质粒,提取质粒并进行定量。在s片段的保守区设计引物和TaqMan探针,对real.timePCR条件进行优化,并提取急性期发病病人总RNA,逆转录为eDNA,与标准品同时检测。[结果
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