探讨酸性肿瘤微环境对胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响及其机制。
方法(1)采用酸碱滴定法调节培养基pH值，分别用pH值为6.4、7.4的培养基（酸性组、正常组）培养人胶质瘤细胞U87、U251，培养3 d后采用Western blotting检测细胞缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)、CD44蛋白的表达。采用Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力，采用免疫荧光染色检测细胞CD44的表达。(2)分别取U87、U251细胞，分为小干扰RNA(siRNA)无义序列组、siRNA-CD44-1组，分别经Lipofectin-3000介导转染siRNA无义序列、siRNA-CD44-1干扰片段，转染后3 d采用Transwell实验检测2组细胞的迁移、侵袭能力。(3)取U87、U251细胞，分为酸性组（用pH值为6.4的培养基培养）、空白对照组、siRNA无义序列组、siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组，后4组细胞均用pH值为7.4的培养基培养。培养4 d后，siRNA无义序列组、siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组细胞分别转染siRNA无义序列、siRNA-CD44-1干扰片段、siRNA-CD44-2干扰片段。转染后3 d采用Western blotting检测5组细胞CD44、N型钙黏素(N-Ca)、波形蛋白及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达。
结果(1)Western blotting检测显示：与正常组比较，酸性组U87、U251细胞HIF-2α、CD44蛋白的表达量明显增高。Transwell迁移和侵袭实验均显示酸性组穿膜细胞数明显多于正常组，差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色显示，酸性组细胞CD44的表达明显多于正常组。(2)Transwell迁移和侵袭实验均显示siRNA-CD44-1组穿膜细胞数明显少于siRNA无义序列组，差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)Western blotting检测显示：与酸性组比较，空白对照组、siRNA无义序列组、siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组U87、U251细胞CD44、N-Ca、波形蛋白、MMP-2的表达量降低。与siRNA无义序列组相比，siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组U87、U251细胞CD44、N-Ca、波形蛋白、MMP-2蛋白的表达量明显降低。
结论酸性肿瘤微环境可通过提高CD44的表达来提高胶质瘤细胞的侵袭、迁移能力。