【摘 要】
：
为研究利用基因重组方法生产人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)衍生多肽的最佳表达及纯化条件,选用大肠杆菌偏爱密码子,以含人GLP-1的质粒为模板,用PCR方法合成全长人GLP-1衍生多肽
【机 构】
：
暨南大学生物工程研究所; 暨南大学生命科学技术学院;
【基金项目】
：
广州市科技攻关计划资助项目(2006Z3-E4152)
论文部分内容阅读
为研究利用基因重组方法生产人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)衍生多肽的最佳表达及纯化条件,选用大肠杆菌偏爱密码子,以含人GLP-1的质粒为模板,用PCR方法合成全长人GLP-1衍生多肽基因,并定向插入到高效表达载体pMFH中,用大肠杆菌BL21进行表达,融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后,用C18Sep-Pak反相柱脱盐,然后融合蛋白经甲酸水解,水解产物经Ni-NTA柱和高效液相色谱(HPLC)纯化制备后,目的肽由质谱鉴定。实验结果表明:利用载体pMFH在BL21中,GLP-1衍生物的最佳诱导表达温度为37℃、诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的最佳浓度为0.6mmol/L,最佳诱导表达时间为6h;HPLC分析和制备GLP-1衍生物最佳条件为:流动相A(10%CNCH3∶90%H2O,0.1%TFA),流动相B(100%CNCH3,0.1%TFA),流速1ml/min,30min线性梯度洗脱,B相至70%,检测波长280nm;质谱鉴定GLP-1衍生物的分子量为5.492kDa,与理论值相符合。在最佳表达及纯化条件下可得GLP-1衍生多肽的产量可达到11.6mg/L发酵产物,纯度≥98%。
其他文献
美国的西进运动是美国历史上的重要事件,也是一次文化的拓疆.西进运动强化了美国的"民主""平等"等政治思想和个体主义的价值观,促使了西部小说的兴起,造就美国本土文学的繁荣
<正>《北京口腔医学》已开通在线投稿系统,网址为:www.bjkqyx.com或http://bjkqyx.yywkt.cn/。作者可以通过该系统投稿、查稿、上传修改稿,审稿专家可以进行网上审稿。作者使
介绍电厂给水加氨自动控制系统的设计及应用。为提高加氨的效果,本文从控制算法和硬件两方面进行研究。系统硬件采用上下位机结构,上位机的intouch9.5组态监控软件和下位机西
<正> 广东桑园栽植密度大,历来桑苗以有性繁殖为主,而目前在发生桑树青枯病的地区,为了稳定桑园面积,需要改种“抗青10号”品种.但由于“抗青10号”要无性繁殖育苗,花工多,单
在TRIPs框架下，对技术创新活动进行监测分析的重要性凸现。文章对技术创新监测方法展开了研究，建立了技术创新监测模型，以实现对产业和竞争对手的动态监测、分析与评估；在此基础
网络教学模式随着互联网的发展,在教学方式上与传统教学相比有重大更新。特别是互联网教学具有的交互性,综合性,共享性,和先进性等特点,能充分提高教师与学生知识传输的质量
目的探讨心可舒片联合阿托伐他汀钙对老年原发性高血压病人颈动脉斑块的临床疗效及安全性。方法 120例老年原发性高血压伴有颈动脉斑块的病人按照随机数字表法分组,观察组给
目的：探讨股骨头置换术治疗老年股骨粗隆间骨折中克氏针的应用价值。方法：收治老年股骨粗隆间骨折患者30例,所有患者均实施股骨头置换术,同时在术中应用克氏针张力带重建大粗隆
近年来,长宁区在区委、区政府的高度重视下.在区老工委、区民政局等职能部门的努力下.积极主动地探索、研究新形势下老龄事业的发展需求.努力寻找发展长宁区为老服务体系和养
侧卧体位是外科手术常见的手术体位,体位的固定通常采用下腹部、骶尾部托将病人固定在手术床上.此方法费时费力,并存在将病人皮肤挤伤的可能.笔者自制侧卧体位约束带,临床应