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【摘 要】 目的：延冰片是由延胡索、冰片以及辅料等组成的片剂，临床用于治疗冠心病，心绞痛。研究旨在制定延冰片中脱氢紫堇碱的含量限度。方法：以脱氢紫堇碱作为延冰片成品的跟踪指标，采用高效液相色谱法测定其含量。结果：延冰片以脱氢紫堇碱作为定性鉴别标准，脱氢紫堇碱的含量不得少4-25mg/g。结论：该方法测定脱氢紫堇碱的含量可行性良好，可作为延冰片质量控制的指标之一。
【关键词】 延冰片；脱氢紫堇碱；含量测定
【中图分类号】R284-1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）18-0017-03
The Content determination of Dehydrocorydaline in Rhizoma corydalis borneol
HOU Xiaolin LIU Fangxin BAO Huiwei ZHANG Chen SHANG Kun*
Changchun University of Traditional Chinese Medicine， Changchun 130117，China
Abstract：Objective Rhizoma corydalis borneol tablets dosage form consists of corydalis rhizome，borneolum syntheticum and auxiliary material， and other two taste of traditional Chinese medicine， mainly used for coronary heart disease， the treatment of angina pectoris.The purpose of this paper is to develop content limit extension of dehydrocorydaline in rhizoma corydalis borneol.Methods Using orthogonal design method， taking the extract the alkaloids content as index， The quality standards for Dehydrocorydaline， borneol tablets dosage form. Quantitative analysis of its content by HPLC.Results The formulation for Dehydrocorydaline as qualitative identification standard， the content of dehydrocorydaline shall not be less than 4-25mg/g. To develop a limit for the product.Conclusion This experiment optimized production technology is considered feasible and reasonable， And the quality is stable and controllable.As one of the indicators of the quality control of Rhizoma corydalis borneol.
Keywords：Rhizoma corydalis borneol； Dehydrocorydaline； Content determination
延胡索为罂粟科紫堇属多年生草本植物延胡索的干燥块茎，又称玄胡、元胡、玄胡索，主要分布于河北、山东、江苏、浙江、内蒙古等地，与山芥、将离、川贝等并称“浙八味”[1]。延胡索具有活血止痛、利气的功效，是活血化瘀、理气止痛、镇静催眠之佳品，尤以止痛、镇痛之功效著称于世[2，3]，临床常用于治疗心律失常、冠心病、心绞痛、气滞血瘀等诸痛。其主要成分为延胡索总生物碱[4，5]。《本草纲目》中记载，延胡索有“活血、止痛、理气、通小便”四大之功效。实验依据延冰片片剂处方中各味药材有效成分的研究，采用高效液相色谱法（HPLC）测定三批延冰片试样中脱氢紫堇碱的含量，同时制定延冰片片剂中脱氢紫堇碱的含量限度[6]。
1 仪器与试药
1-1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪；EL-204十万分之一分析天平。
1-2 试剂 脱氢紫堇碱对照品（批号：MUST-15032613，中国药品生物制品检定所）；延胡索药材（长春宏检药材公司提供）；乙腈為色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2-1 色谱条件[7] 参考相关文献及预试验，色谱条件为：流动相：乙腈-水（含0-1% 三乙胺和0-4% 冰乙酸）（22∶ 78）；检测波长：338nm；柱温：30℃；流速：1-0ml/min。
2-2 波长（λmax）选择 精密移取脱氢紫堇碱对照品溶液和供试品溶液，以无水乙醇溶液为空白，在200～450nm波长处扫描，结果见图1、2。
由图1、2可知，脱氢紫堇碱对照品溶液和供试品溶液在338nm有最大吸收，通过查阅文献和实验数据分析，最终以338nm为测定波长。
2-3 溶液的制备
2-3-1 对照品溶液的制备 取脱氢紫堇碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0-2mg的溶液，即得。
2-3-2 延冰片溶液的制备 取本品粉末0-5g（过三号筛），加甲醇提取，定容于25ml的容量瓶中，摇匀，过滤，备用。
2-3-3 延胡索药材溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，加甲醇提取，后定容于25ml的容量瓶中，摇匀，过滤，取续滤液过滤膜，即得。 2-4 样品的色谱图 分别精密吸取对照品溶液、延冰片溶液、延胡索药材溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见图3、4、5。
2-5 方法学考察
2-5-1 线性范围的考察 分别吸取对照品溶液（浓度为0-01944mg/ml）4、6、10、12、14、18μl注入液相色谱仪，依法测定。以对照品进样量为横坐标（x），以峰面积为纵坐标（y），进行线性回归，得到回归方程为：y=77-6x+0-378，R2=1。表明进样量与峰面积呈现的线性关系表现为良好。见表1、图6。
表1 线性关系考察结果
2-5-2 精密度试验 分别取对照品溶液（浓度为0-01944mg/ml）10 μl，连续进样6次，测定其峰面积。精密度试验的相对标准偏差为0-13%，符合药典标准。见表2。
表2 精密度试验结果表
2-5-3 稳定性试验 分别取对照品溶液（浓度为0-01944mg/ml）和供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h后注入高效液相色谱仪，进样量10μl。其对照品和供试品溶液稳定性的相对标准偏差分别为0-91%和0-17%，说明二者在12 h内稳定性较好，符合药典标准。见表3。
表3 稳定性试验结果
2-5-4 重现性试验 取延冰片（批号：20131101）样品，精密称量，平行处理6份作为供试品溶液，注入液相色谱仪，进样量为10μl。延冰片片剂中脱氢紫堇碱的平均含量5-2591mg/g，其相应的相对标准偏差为0-70%，符合药典标准。见表4。
表4 重现性试验结果
2-5-5 加样回收率试验 取延冰片（批号：20131101，含量为5-2591mg/g）样品6份，精密称定，分别加入的脱氢紫堇碱对照品（浓度为0-01944mg/ml）0-25g，按“2-3”项下供试品溶液的制备方法进行制备并依法测定，计算其加样回收率。结果延冰片的回收率均在95%～105%之间，平均回收率是99-25%，均符合药典标准。见表5。
表5 脱氢紫堇碱回收率试验结果
2-6 含量测定 精密称取3批不同批号的延冰片样品，按“2-3”项下供试品溶液的制备方法进行制备并依法测定。结果三批延冰片片剂样品中脱氢紫堇碱的平均含量为5-32mg/g。见表6。
表6 延冰片中脱氢紫堇碱的含量测定结果
3 讨论
试验对流动相的筛选做了大量尝试，试用了不同溶剂及不用比例、不同pH的溶液进行试验，结果以乙腈-水（含0-1% 三乙胺和0-4% 冰醋酸）（22∶ 78）为流动相最佳，峰形、分离度、出峰时间等较好。
药方延胡索中脱氢紫堇碱的含量、转移率、加速与长期稳定性均符合要求。在2010版《中国药典》一部延胡索含量测定项下，检测成分为脱氢紫堇碱，而脱氢紫堇碱药材最低限度为0-08%，含量偏低。综上所述，延冰片中脱氢紫堇碱的平均含量为5-32mg/g，而含量限度可在平均含量下浮20%范围内容制定，即延冰片中含脱氢紫堇碱的含量不得少于4-25mg/g。参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2]刘芳，罗跃娥.延胡索研究概况[J].天津中医学院学报，2005，24（4）：240-242.
[3]黄云，陈华师.中药延胡索的研究进展[C].中华中医药学会中药炮制分会2011年学术年会论文集，2011.
[4]江紀武.植物药有效成分手册（精装）[M].北京：人民卫生出版社，1986.
[5]Wang wen-shu，Xiao Wei. Study on the Chemical Composeition from Chinese Traditional Medicine of Corydalis yanhusuo [J]. Journal of the CUN，2007，16（l）：80-82.
[6]张萍.延胡索提取物治疗冠心病室性心律失常的机理研究[D].北京：北京中医药大学，2012.
[7]王红，田明，王一，等.高效液相色谱法测定延胡索总生物碱滴丸中巴马汀碱和脱氢紫堇碱含量[J].中医药学报.2013，4（1）：96-98.
（收稿日期：2015-06-23）
【关键词】 延冰片；脱氢紫堇碱；含量测定
【中图分类号】R284-1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）18-0017-03
The Content determination of Dehydrocorydaline in Rhizoma corydalis borneol
HOU Xiaolin LIU Fangxin BAO Huiwei ZHANG Chen SHANG Kun*
Changchun University of Traditional Chinese Medicine， Changchun 130117，China
Abstract：Objective Rhizoma corydalis borneol tablets dosage form consists of corydalis rhizome，borneolum syntheticum and auxiliary material， and other two taste of traditional Chinese medicine， mainly used for coronary heart disease， the treatment of angina pectoris.The purpose of this paper is to develop content limit extension of dehydrocorydaline in rhizoma corydalis borneol.Methods Using orthogonal design method， taking the extract the alkaloids content as index， The quality standards for Dehydrocorydaline， borneol tablets dosage form. Quantitative analysis of its content by HPLC.Results The formulation for Dehydrocorydaline as qualitative identification standard， the content of dehydrocorydaline shall not be less than 4-25mg/g. To develop a limit for the product.Conclusion This experiment optimized production technology is considered feasible and reasonable， And the quality is stable and controllable.As one of the indicators of the quality control of Rhizoma corydalis borneol.
Keywords：Rhizoma corydalis borneol； Dehydrocorydaline； Content determination
延胡索为罂粟科紫堇属多年生草本植物延胡索的干燥块茎，又称玄胡、元胡、玄胡索，主要分布于河北、山东、江苏、浙江、内蒙古等地，与山芥、将离、川贝等并称“浙八味”[1]。延胡索具有活血止痛、利气的功效，是活血化瘀、理气止痛、镇静催眠之佳品，尤以止痛、镇痛之功效著称于世[2，3]，临床常用于治疗心律失常、冠心病、心绞痛、气滞血瘀等诸痛。其主要成分为延胡索总生物碱[4，5]。《本草纲目》中记载，延胡索有“活血、止痛、理气、通小便”四大之功效。实验依据延冰片片剂处方中各味药材有效成分的研究，采用高效液相色谱法（HPLC）测定三批延冰片试样中脱氢紫堇碱的含量，同时制定延冰片片剂中脱氢紫堇碱的含量限度[6]。
1 仪器与试药
1-1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪；EL-204十万分之一分析天平。
1-2 试剂 脱氢紫堇碱对照品（批号：MUST-15032613，中国药品生物制品检定所）；延胡索药材（长春宏检药材公司提供）；乙腈為色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2-1 色谱条件[7] 参考相关文献及预试验，色谱条件为：流动相：乙腈-水（含0-1% 三乙胺和0-4% 冰乙酸）（22∶ 78）；检测波长：338nm；柱温：30℃；流速：1-0ml/min。
2-2 波长（λmax）选择 精密移取脱氢紫堇碱对照品溶液和供试品溶液，以无水乙醇溶液为空白，在200～450nm波长处扫描，结果见图1、2。
由图1、2可知，脱氢紫堇碱对照品溶液和供试品溶液在338nm有最大吸收，通过查阅文献和实验数据分析，最终以338nm为测定波长。
2-3 溶液的制备
2-3-1 对照品溶液的制备 取脱氢紫堇碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0-2mg的溶液，即得。
2-3-2 延冰片溶液的制备 取本品粉末0-5g（过三号筛），加甲醇提取，定容于25ml的容量瓶中，摇匀，过滤，备用。
2-3-3 延胡索药材溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，加甲醇提取，后定容于25ml的容量瓶中，摇匀，过滤，取续滤液过滤膜，即得。 2-4 样品的色谱图 分别精密吸取对照品溶液、延冰片溶液、延胡索药材溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见图3、4、5。
2-5 方法学考察
2-5-1 线性范围的考察 分别吸取对照品溶液（浓度为0-01944mg/ml）4、6、10、12、14、18μl注入液相色谱仪，依法测定。以对照品进样量为横坐标（x），以峰面积为纵坐标（y），进行线性回归，得到回归方程为：y=77-6x+0-378，R2=1。表明进样量与峰面积呈现的线性关系表现为良好。见表1、图6。
表1 线性关系考察结果
2-5-2 精密度试验 分别取对照品溶液（浓度为0-01944mg/ml）10 μl，连续进样6次，测定其峰面积。精密度试验的相对标准偏差为0-13%，符合药典标准。见表2。
表2 精密度试验结果表
2-5-3 稳定性试验 分别取对照品溶液（浓度为0-01944mg/ml）和供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h后注入高效液相色谱仪，进样量10μl。其对照品和供试品溶液稳定性的相对标准偏差分别为0-91%和0-17%，说明二者在12 h内稳定性较好，符合药典标准。见表3。
表3 稳定性试验结果
2-5-4 重现性试验 取延冰片（批号：20131101）样品，精密称量，平行处理6份作为供试品溶液，注入液相色谱仪，进样量为10μl。延冰片片剂中脱氢紫堇碱的平均含量5-2591mg/g，其相应的相对标准偏差为0-70%，符合药典标准。见表4。
表4 重现性试验结果
2-5-5 加样回收率试验 取延冰片（批号：20131101，含量为5-2591mg/g）样品6份，精密称定，分别加入的脱氢紫堇碱对照品（浓度为0-01944mg/ml）0-25g，按“2-3”项下供试品溶液的制备方法进行制备并依法测定，计算其加样回收率。结果延冰片的回收率均在95%～105%之间，平均回收率是99-25%，均符合药典标准。见表5。
表5 脱氢紫堇碱回收率试验结果
2-6 含量测定 精密称取3批不同批号的延冰片样品，按“2-3”项下供试品溶液的制备方法进行制备并依法测定。结果三批延冰片片剂样品中脱氢紫堇碱的平均含量为5-32mg/g。见表6。
表6 延冰片中脱氢紫堇碱的含量测定结果
3 讨论
试验对流动相的筛选做了大量尝试，试用了不同溶剂及不用比例、不同pH的溶液进行试验，结果以乙腈-水（含0-1% 三乙胺和0-4% 冰醋酸）（22∶ 78）为流动相最佳，峰形、分离度、出峰时间等较好。
药方延胡索中脱氢紫堇碱的含量、转移率、加速与长期稳定性均符合要求。在2010版《中国药典》一部延胡索含量测定项下，检测成分为脱氢紫堇碱，而脱氢紫堇碱药材最低限度为0-08%，含量偏低。综上所述，延冰片中脱氢紫堇碱的平均含量为5-32mg/g，而含量限度可在平均含量下浮20%范围内容制定，即延冰片中含脱氢紫堇碱的含量不得少于4-25mg/g。参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2]刘芳，罗跃娥.延胡索研究概况[J].天津中医学院学报，2005，24（4）：240-242.
[3]黄云，陈华师.中药延胡索的研究进展[C].中华中医药学会中药炮制分会2011年学术年会论文集，2011.
[4]江紀武.植物药有效成分手册（精装）[M].北京：人民卫生出版社，1986.
[5]Wang wen-shu，Xiao Wei. Study on the Chemical Composeition from Chinese Traditional Medicine of Corydalis yanhusuo [J]. Journal of the CUN，2007，16（l）：80-82.
[6]张萍.延胡索提取物治疗冠心病室性心律失常的机理研究[D].北京：北京中医药大学，2012.
[7]王红，田明，王一，等.高效液相色谱法测定延胡索总生物碱滴丸中巴马汀碱和脱氢紫堇碱含量[J].中医药学报.2013，4（1）：96-98.
（收稿日期：2015-06-23）