目的构建熔解曲线分析法同时检测临床常见3种革兰阴性病原菌。方法选取临床常见的铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌作为本课题研究的检测菌种。对目标菌种设计种特异性引物。构建熔解曲线法,并进行特异性验证。检测不同拷贝浓度稀释液进行敏感性分析。检测临床分离目标菌各20株,进行稳定性评价。结果 (1)特异性验证结果显示,目标菌种均有特异性熔解曲线,Tm值依次为88.37℃;86.32℃;80.86℃;(2)敏感性分析结果显示,3种目标菌可检测到的拷贝浓度稀释液依次为:1.34×103拷贝/ml,3.67×103拷贝/ml,3.01×103拷贝/ml;(3)稳定性评价的结果显示,3种目标菌其平均Tm值依次为88.54±0.662;86.38±0.727;80.12±0.607。结论所构建的熔解曲线法具有较好的特异性、敏感性和稳定性;并具有快速、简便、成本低廉的特点,可用于临床样本的检测。