【摘 要】
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为了建立鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory virus,PRRSV)经典毒株、高致病性毒株与类NADC30毒株的快速检测方法,根据不同毒株的ORFla核苷酸
【机 构】
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河北农业大学动物医学院,河北保定071000;吉林师范大学生命科学学院,吉林四平136000;北京农学院动物科学技术学院,北京102206
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为了建立鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory virus,PRRSV)经典毒株、高致病性毒株与类NADC30毒株的快速检测方法,根据不同毒株的ORFla核苷酸序列,设计并合成PRRSV特异性引物.经过引物筛选以及对退火温度、引物浓度的优化,建立了应用1对引物鉴别检测经典、高致病性及类NADC30 PRRSV毒株的PCR方法.该方法的反应体系为20 μL,退火温度为58℃,引物含量为10 pmol,对经典毒株、高致病毒株和类NADC30毒株cDNA的最低检出量分别为12.16、138.70和59.30 pg;对猪瘟病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型等的检测均为阴性.进而用建立的PCR方法检测2017-2019年采集的38份PRRSV阳性组织病料,结果PRRSV总检出率为100％,其中类NADC30毒株、高致病性毒株与经典毒株的检出率分别为89.5％(34/38)、26.3％(10/38)和7.9％(3/38),并检测到2种或3种不同PRRSV毒株混合感染样本.该检测结果表明,建立的PCR方法可以用于PRRSV感染临床病例的检测,提示当前河北省部分地区猪场类NADC30毒株已成为优势流行毒株,不同PRRSV毒株的混合感染状态复杂多样.
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