【摘 要】
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从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)核蛋白(NP)基因的质粒pUCNP中切下NP基因片段,将其亚克隆到pSY538质粒,再将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因也平端克隆到pSY5
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,农业部动物流感研究中心
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从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)核蛋白(NP)基因的质粒pUCNP中切下NP基因片段,将其亚克隆到pSY538质粒,再将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因也平端克隆到pSY538质粒,然后切下同时含有NP及LacZ基因的片段,再亚克隆到禽痘病毒载体pSY681,从而构建出表达核蛋白基因的重组禽痘病毒转移载体pSY(NP+LacZ).应用脂质体介导的方法将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,在X-gal存在的条件下,利用蓝白斑筛选、数轮蚀斑纯化以及PCR、Western-blot鉴定,结果证明,获得了能高效表达AIV NP蛋白的重组禽痘病毒rFPV-NP.SPF鸡体内的免疫保护试验结果表明,它能够诱导机体产生较高水平的NP特异性抗体,并对H5N1和H7N1这2种亚型高致病力禽流感病毒的攻击提供一定的保护.
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