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目的 探讨Cyclin D1干扰RNA对人肝癌细胞株HepG2细胞中Cyclin D1 mRNA的表达、对细胞周期和增殖以及蛋白质组表达变化的影响.方法构建Cyclin D1干扰RNA的重组质粒pU6-Cyclin D1-siRNA,并设立阴性对照空载体转染组和空白对照组.采用脂质体介导转染肝癌细胞株HepG2细胞,经G418筛选阳性转染细胞克隆,流式细胞术、MTT法检测其细胞周期、细胞生长曲线的改变;反转录PCR法及双向凝胶电泳-质谱技术比较转染前后Cyclin D1 mRNA的表达和蛋白质组表达的变化.结果⑴成功构建了Cyclin D1干扰RNA的重组质粒pU6-Cyclin D1-siRNA.并获得稳定转染组细胞HepG2-Cyclin D1 siRNA.⑵稳定转染组细胞与阴性对照组细胞和空白对照组相比,Cyclin D1 mRNA表达水平降低.细胞周期明显改变,从G1期到S期发生阻滞.⑶通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到稳定转染组低表达蛋白6个,经数据库搜索分别是锌指蛋白ZFP-36、角蛋白19、热休克蛋白伴侣素10、波形蛋白、肿瘤拒绝抗原gp96、未知蛋白.这些蛋白与细胞的增殖、细胞凋亡的信号转导调节、以及肿瘤的发生、发展等相关.结论 Cyclin D1干扰RNA可明显降低肝癌HepG2细胞Cyclin D1 mRNA的表达,亦可阻滞肝癌HepG2的细胞周期,抑制细胞增殖;Cyclin D1干扰RNA干扰后差异表达的蛋白质涉及细胞的增殖、细胞凋亡的信号转导调节、以及肿瘤的发生、发展。