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我们利用了细胞膜表面易生物素化和生物素与链亲和素能高效、几乎不可逆的结合——这两个特性建立了新型蛋白质锚定生物技术平台。即用含链亲和素的双功能融合蛋白对生物素化的细胞膜进行高效的锚定修饰。该平台可使多种具有免疫协作作用的基因重组细胞因子同时固定在肿瘤病灶及其周围从而促进机体产生更为有效的抗肿瘤免疫反应。白细胞介素 15(IL-15)/链亲和素(SA)融合蛋白的制备是该平台中的一个重要因子。制备白细胞介素15 (IL-15)/链亲和素(SA)融合蛋白,并对其活性进行检测,研究人源不同基因型 IL-15/SA 融合蛋白的活性,并对人源和鼠源两种 IL-15/SA 融合基因的同源性进行探讨,为我们建立的蛋白锚定技术平台提供理论和应用依据,即用含链亲和素的双功能融合蛋白对生物素化的细胞表面进行高效的锚定修饰。构建原核表达载体 pET24a-hIL-5-SA、pET24a-SA-hIL-15和 pET24a-mIL-15-SA 转化大肠杆菌 BL21(DE3),构建过程中我们引入甘氨酸、丝氨酸的链接肽 (L),此15肽北常灵活,有助于融合蛋白中各单元蛋白质分子的独立折叠,从而保存各自的生物活性,最终提高融合蛋白的双重活性。用 IPTG 诱导重组蛋白的表达,用 His 标签的镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,然后对其进行合理复性。用制备的 hIL-15-SA、SA-hIL-15 和 mIL-15-SA 双功能融合蛋白作用于小鼠脾细胞,同时用融合蛋白修饰的鼠 B16.F10肿瘤细胞碎片作用于小鼠脾细胞,MTT 法检测小鼠 T、B 淋巴细胞的增殖情况和细胞表面修饰对肿瘤细胞活力及其生长情况的影响。结果显示三种重组融合蛋白在大肠杆菌实现了高效表达(约占细菌总蛋白的20%),通过纯化和复性制备的三种双功能融合蛋白具有双重活性,即:链亲和素介导的对生物素高效特异的结合活性;IL-15的促 T、B 细胞增殖活性。对三者活性进行对比发现:hIL-15-SA 和 SA-hIL-15两种融合蛋白对比,在以鼠力实验动物的体外测活实验中, SA 在 N 端的融合蛋白(即 SA-hIL-15)比在 C 端的融合蛋白(即 hIL-15-SA)活性高。SA-hIL-15 和 mIL-15-SA 两种融合蛋白对比,在以鼠为实验动物的体外测活实验中,鼠源的融合蛋白(即 mIL-15-SA)活性大于人源融合蛋白(即 SA-hIL-15)的活性。二种融合蛋白能高效修饰表面已生物素化的肿瘤细胞,并保留其自身活性,可为肿瘤疫苗研究提供理论和应用依据。