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<正>骨骼肌是由各种各样的肌原纤维型构成的,是具有独特的结构蛋白和代谢酶联合表达的结果, 肌纤维型通常由存在的肌球蛋白重链异构体(MyHCs)所确定。 MyHCs是肌原纤维粗丝的重要结构蛋白质,它能将化学能量转变成机械能以供肌肉收缩。就形式多样的肌肉结构蛋白质来说,MyHCs 具有一种高度保守的多基因家族编码。应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测成年家兔后肢肌胫前肌、腓肠肌和比目鱼肌的肌球蛋白重链异构体(MyHCs),采用大体解剖法依次取出家兔的每块骨骼肌,分别与样品缓冲液一起研磨成肌细胞匀浆,经高速冷冻离心后取出上清液,按照不连续SDS-聚丙烯酰胺小孔梯度凝胶电泳操作程序依次实验。 (1)制取8％分离胶和4％浓缩胶,先后灌注于垂直电泳槽的灌胶模具即两块玻璃板之间,并加入各块骨骼肌细胞匀浆上清液样品;(2)注入电极缓冲液后作阳极电泳,依次做预电泳与恒定的稳压电流,记录选择的电参数; (3)采用多色银染法染色后予以检测。结果表明:家兔骨骼肌纤维肌球蛋白重链异构体(MyHCs)典型的聚丙烯酰胺凝胶电泳形式,在电泳图谱上可以确定四种MyHcs, 以便提高MyHCsⅡa,MyHCs Ⅱd(或Ⅱx),MyHCsⅡb, MyHCs Ⅰ的蛋白质条带的迁移率。在家兔的骨骼肌,各种肌球蛋白的重链异构体与被分别指定为组织化学研究的ⅡA,ⅡD(或Ⅱx),ⅡB 型及Ⅰ型肌纤维分型是一致的。家兔胫前肌与腓肠肌的肌球蛋白重链异构体(MyHCs)电泳条带分别显示MyHCsⅡa、MyHCs Ⅱd(或Ⅱx)、MyHCsⅡb、MyHCs Ⅰ共四种。家兔比目鱼肌的肌球蛋白重链异构体(MyHCs)电泳条带分别显示MyHCsⅡa、MyHCsⅡd(或Ⅱx)、 MyHCsⅠ共三种, 未见MyHCsⅡb。并相对应于骨骼肌纤维表型ⅡA型、ⅡD(或Ⅱx)型、ⅡB型及Ⅰ型纤维。重点就肌球蛋白重链异构体(MyHCs)Ⅱa与聚丙烯酰胺凝胶的有效孔径和分子筛效应进行探讨。在神经肌肉活力,机械负重或不负重,改变激素的特征及衰老功能均能改变MyHCs按照快转慢或慢转快的顺序转化:MyHCs Ⅰ←→MyHCsⅡa←→MyHCsⅡd←→MyHCsⅡb。显然, MyHCsⅡa作为快肌与慢肌互相转化的枢纽。电泳时在移动界面到达浓缩胶和分离胶的界面时凝胶的pH值明显增加, 导致甘氨酸的大量解离和有效泳动率增加,使它越过蛋白质并直接在氯离子后移动。于是肌肉蛋白质分子在均一的电压梯度和pH值中泳动,并根据固有带电性和分子大小进行分离,形成清晰的蛋白质条带供我们分析。