论文部分内容阅读
目的观察反义寡核苷酸干扰BMP-2表达后培养的瘢痕成纤维细胞生长增殖、胶原合成的变化。方法根据人BMP-2的DNA序列,设计及合成反义寡核苷酸及错义寡核苷酸,将培养的瘢痕成纤维细胞分为4组:A组(对照组)、细胞+培养液;B组、细胞+培养液+正义寡核苷酸;C组,细胞+培养液+错义寡核苷酸;D组、细胞+培养液+反义寡核苷酸。将各寡核苷酸与脂质体的混合物分别加入对应组转染成纤维细胞。采用Western blot方法检测各组BMP-2的表达。采用MTT分析法测定各组成纤维细胞的生长抑制率。采用羟脯氨酸(hydroxypline,HP)比色法测定四组细胞胶原合成情况;采用RT-PCR测定四组细胞内Ⅰ型胶原mRNA表达情况。结果 1、反义寡核苷酸可抑制BMP-2的表达Western blot结果显示错义核苷酸与正义核苷酸对BMP-2的表达无明显影响,而反义寡核苷酸均有不同程度抑制BMP-2的表达,特别是asODN2对BMP-2表达的抑制率达80%。2、BMP-2反义寡核苷酸抑制成纤维细胞的增殖MTT分析显示在不同时间点B组及C组与A组(对照组)的细胞生长率无显著性差别,而BMP-2反义寡核苷酸(asODN2)可抑制成纤维细胞生长、增殖(P<0.05)。3、BMP-2反义寡核苷酸抑制成纤维细胞的胶原合成采用羟脯氨酸(hydroxypline,HP)比色法分析结果发现,BMP-2反义寡核苷酸降低成纤维细胞内BMP-2的表达,可抑制细胞中胶原的生成,而BMP-2正义寡核苷酸组及BMP-2错义寡核苷酸组,细胞中胶原的合成与对照组无明显变化。4、BMP-2反义寡核苷酸可抑制细胞中Ⅰ型胶原的合成RT-PCR测定四组细胞内Ⅰ型胶原mRNA表达情况显示BMP-2反义寡核苷酸可抑制细胞中Ⅰ型胶原的合成,而BMP-2正义寡核苷酸组及BMP-2错义寡核苷酸组,细胞中Ⅰ型胶原的合成与对照组无明显变化。结论通过反义寡核苷酸干扰BMP-2的mRNA表达,阻碍BMP-2的蛋白表达,可抑制成纤维细胞的生长、增殖。可减少成纤维细胞内胶原的合成,Ⅰ型胶原的mRNA表达减少。BMP-2具有促进成纤维细胞生长、增殖及胶原合的功能。