人绒毛膜干细胞的分离培养研究

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目的建立体外分离纯化绒毛膜干细胞的方法,并且研究绒毛膜干细胞的基本生物学特征。方法取妊娠6~10周,发育正常,自愿流产的孕妇绒毛膜,0.25%胰酶消化分离绒毛膜干细胞。体外传代培养,并进行向成骨、成脂细胞的诱导分化培养。结果细胞原代培养3~4天后,细胞明显贴壁,可看到细胞呈类圆形,偶见短梭形细胞,同时可见到大量的悬浮细胞,通过换液悬浮细胞基本除去。第7天时,细胞数量明显增多生长加速,而类圆形细胞减少,梭形细胞明显增加。第14天左右细胞达到80%的融合,细胞形态逐渐均一,呈长梭形。给予胰酶消化传代培养,细胞生长情况良好,倍增时间明显缩短,每3~4天可传代。诱导后细胞生长变慢,以向脂肪细胞诱导的绒毛膜干细胞更为明显,细胞形态无明显变化,仍呈长梭形,第6天向成骨细胞诱导的细胞形态由梭形变为多角形或立方形;向脂肪细胞诱导的细胞生长明显减慢,细胞体积明显增大,由梭形变成扁平多角形。结论成功建立体外培养分离纯化绒毛膜干细胞的方法。
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