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目的探究永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)香烟烟雾长期染毒后蛋白组学表达差异。生物信息学分析以期研究非小细胞肺癌的发生、发展相关蛋白质的变化规律,有利于肿瘤早期诊断相关生物标志物的发现。材料和方法选取对数生长期的BEAS-2B细胞以每孔1×105的细胞密度接种于Transwell膜中,将Transwell培养皿放置于细胞气体染毒装置中进行染毒,细胞连续染烟2次记作染烟1代,共染烟30代。从BEAS-2B、S5、S20、S30细胞中提取总蛋白,使用定量蛋白质组学串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)技术,胰酶酶解后用TMT标记肽段,随后使用高效液相色谱分级,并用液相色谱-质谱串联分析,通过质谱定量分析检测出肽段对应在每个样本中的定量值,采用蛋白所对应特异性肽段的定量值中值作为该蛋白的定量值,以达到对蛋白质的定量检测。采用1.2倍作为差异表达倍数值Fold change筛选出差异表达蛋白,进行GO和KEGG等生物信息学分析。将不同染烟代数细胞中的差异表达蛋白取交集,筛选出随染烟代数增加表达趋势一致的蛋白。结果本试验共鉴定到6487个蛋白,其中5579个可定量。共筛选出279个差异表达蛋白(Fold change>1.2,P<0.05),其中上调蛋白有131个,下调的蛋白有148个。GO分析可以发现差异表达蛋白的分子功能主要为结合作用;在细胞成分中,差异表达蛋白富集位置主要集中在细胞和细胞器、细胞膜方面;主要涉及的细胞过程有细胞进程、单生物进程、生物调节、刺激反应和代谢过程。对差异表达蛋白进行了亚细胞结构定位的预测,结果显示差异表达蛋白主要定位于细胞质和细胞核中。KEGG Pathways分析显示差异表达的蛋白共参与了50条信号通路,其中癌症的中心碳代谢通路(Central carbon metabolism)、DNA复制通路(DNA replication)、细胞粘附通路〔Cell adhesion molecules(CAMs)〕、细胞周期(Cell cycle)、PI3K-Akt通路均有明显富集。与BEAS-2B细胞相比,随着染烟代数的增加,各染烟组的差异表达蛋白数量也呈上升趋势,其中PTPRJ、PPME1、SLC7A5蛋白随染烟代数增加保持上调趋势;NT5E、ARHGDIB蛋白随染烟代数增加有持续下调趋势。结论筛选出多个与香烟烟雾的长期暴露导致人永生化支气管上皮细胞BEAS-2B恶性转化的差异表达蛋白,其通路显示与肿瘤的发生、发展关联。