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研究背景:IL-35是近年新发现的、具有免疫抑制功能的细胞因子,由Ebi3和p35两个亚基组成,可显著抑制Teff(CD4~+CD25~-T)细胞的增殖并诱导其转化为一种IL-35依赖的诱导调节性T细胞(iTr35)。作为母胎界面中的重要组成部分,既往研究证实胎盘滋养细胞可同时表达IL-35的两个亚单位成分Ebi3蛋白和p35蛋白。研究目的:本研究旨在探讨绒毛滋养细胞分泌的IL-35在维持妊娠局部免疫耐受中的作用,并进一步验证外源性IL-35在治疗自然流产中的作用。研究方法:采用real time RT-PCR、ELISA、免疫组化和免疫荧光技术检测IL-35在妊娠早期的绒毛滋养细胞及绒毛外滋养细胞中的表达和分泌。利用CCK8、Real time RT-PCR、流式细胞术和Western blot技术检测滋养细胞上清对Teff的增殖抑制及诱导转化作用。应用流式细胞术及液态悬浮芯片技术分析滋养细胞上清诱导产生的iTR35的分子表型和细胞因子分泌谱。在体内实验中,分别构建正常妊娠和易流产小鼠模型,并提取两组蜕膜组织及其内的Teff细胞进行Real time RT-PCR、流式细胞术和Western blot分析,比较两者IL-35表达水平及iTr35表型。应用小鼠rIL-35腹腔注射治疗易流产小鼠,研究其对易流产小鼠胚胎吸收率的影响,比较治疗组和对照组蜕膜Teff细胞中IL-35的表达及iTR35表型。结果:妊娠早期的绒毛滋养细胞及绒毛外滋养细胞均可表达和分泌IL-35。滋养细胞上清中的IL-35可显著抑制Teff的增殖并进一步诱导其转化生成iTr35。滋养细胞分泌的IL-35诱导生成的iTr35有其特殊的分子表型及细胞因子分泌谱。正常妊娠小鼠胎盘组织及其内Teff细胞的IL-35在转录水平和蛋白水平上均显著高于易流产小鼠。正常妊娠小鼠蜕膜组织CD4~+T细胞中订R35的表达显著高于易流产小鼠。通过对易流产小鼠进行IL-35腹腔注射治疗可显著降低其胚胎吸收率并提高IL-35和iTr35的表达。结论:本研究结果证实,绒毛滋养细胞分泌的IL-35通过调节蜕膜Teff的增殖和分化从而维持母胎界面的免疫耐受,并且对自发性流产有一定治疗作用。本研究结果对揭示独特的母胎防御机制,补充并建立新的免疫耐受理论具有重要意义。