论文部分内容阅读
目的探讨沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)对激素耐药淋巴细胞P-gP表达的调控作用。方法分离培养NZW/LacJ狼疮小鼠脾脏淋巴细胞,予小剂量甲基强的松龙(2μg/ml)诱导耐药;实验分四组:激素耐药组、SIRT1-siRNA转染低剂量(0.1μg/100ul)组、SIRT1-siRNA转染高剂量(0.2μg/100ul)组、SIRT1慢病毒质粒转染(MOI=10)组,每组三个复孔,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养72h,检测淋巴细胞SIRT1-mRNA(荧光定量RT-PCR)及蛋白(western blot)表达水平、淋巴细胞核内FOXO1浓度(western blot)、多药耐药基因MDR1-mRNA(荧光定量RTPCR)及其表达产物P-gp水平(流式细胞术)、细胞内P-gP转运底物罗丹明123水平的变化(流式细胞术),对检测结果进行统计分析。结果 1.狼疮鼠脾淋巴细胞经小剂量甲强龙诱导后P-gP表达明显上调(25.2±8.5%vs正常组6.7±1.6%)、细胞内罗丹明123积累显著下降(32.5±8.2%vs正常组52.8±5.1%),差异有统计学意义(P<0.05)。2.SIRT1-siRNA转染低、高剂量组SIRT1mRNA和蛋白水平均低于激素耐药组(0.29±0.08、0.22±0.01 vs 1.00;0.48±0.01、0.46±0.01 vs 0.61±0.03,p<0.05);其细胞核内FOXO1蛋白水平降低(0.61±0.07、0.35±0.04 vs0.79±0.13,p<0.05);MDR1-mRNA表达下调(0.40±0.01、0.31±0.04vs 1.00,p<0.05)其转录产物P-gp水平亦下降(9.87±2.89%、9.17±2.69%vs 15.36±4.12%,p<0.05);细胞内罗丹明123积累则显著增加(56.77±13.64%、59.97±13.08%vs 40.55±8.62%,p<0.05)。3.SIRT1慢病毒质粒转染组SIRT1mRNA和蛋白水平明显较激素耐药组高(4.22±0.35 vs 1.00;0.86±0.06 vs 0.61±0.03,p<0.05);其细胞核内FOXO1蛋白水平增高(0.94±0.02 vs 0.79±0.13,p<0.05);MDR1-mRNA表达上调(3.91±0.46 vs1.00,p<0.05)其转录产物P-gP水平升高(19.42±2.06 vs 15.36±4.12,p<0.05);细胞内罗丹明123积累减少(25.121±10.72 vs 40.55±8.62,p<0.05)。结论小剂量甲强龙可诱导狼疮鼠脾淋巴细胞P-gP高表达产生激素耐药,其信号通路与SIRT1上调核内转录因子FOXO1,启动MDR1mRNA转录,最终导致P-gp高表达,从而介导细胞产生激素耐药相关。该耐药现象可通过下调SIRT1水平逆转、或上调其水平而增强,提示SIRT1可作为逆转P-gP介导狼疮激素耐药新的干预靶点。