MPP~+通过促进一氧化氮过度生成而抑制内源性硫化氢的合成

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目的:我们研究发现MPP+可通过抑制PC12细胞内源性硫化氢的生成而损伤PC12细胞。PC12细胞内主要的硫化氢合酶是胱硫醚-β-合成酶(Cystathionine-beta-synthase,CBS)。有研究表明一氧化氮(Nitric oxide,NO)对CBS活性具有抑制作用,为此我们将探讨MPP+是否通过促进一氧化氮过度生成而抑制内源性硫化氢的合成。方法:一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)检测试剂盒和NO检测试剂盒分别检测PC12细胞NOS的活性和NO的生成量;亚甲基蓝比色法检测PC12细胞培养上清液中H2S含量和细胞CBS的活性。结果:(1)MPP+(0.5、1、2mmol/L)作用PC12细胞24h后,可浓度依赖性地增强PC12细胞NOS的活性、增加PC12细胞上清中NO的含量,表明MPP+可通过上调NOS的活性而促进PC12细胞NO的生成。(2)提前30min给予内源性NOS抑制剂非对称性二甲基精氨酸(asymmol/Letric dimethylarginine,ADMA,0.32mmol/L)可显著抑制MPP+(2mmol/L)对NOS的激活作用,降低MPP+(2mmol/L)作用后PC12细胞上清中NO的含量。(3)MPP+(2mmol/L)作用PC12细胞24h后,细胞CBS的活性和细胞上清中H2S的含量显著降低,MPP+对细胞CBS的活性和内源性H2S的生成具有抑制作用;而提前30 min给予ADMA(0.32mmol/L)预处理,可显著逆转MPP+(2mmol/L)对细胞CBS的活性和内源性H2S生成的抑制作用,表明ADMA对MPP+抑制PC12细胞CBS活性和内源性H2S的生成具有拮抗作用。结论:MPP+对内源性H2S生成具有抑制作用,其机理可能与其过度激活NOS、促进NO大量生成,从而导致CBS活性下降有关。
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