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目的:通过磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(AnnexinV/PI)流式细胞分析法和原位末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)标记法(TUNEL法)检测肝细胞凋亡,比较两种方法的优缺点。方法:以体外培养的人肝细胞株HL-7702为研究对象,分别设立TGF-β1组(加入TGF-β1至终浓度为20ng/ml,作用72h后收集细胞进行检测)和正常对照组(加入等量PBS),采用AnnexinV/PI流式细胞分析法和TUNEL法检测肝细胞凋亡百分率。结果:正常活细胞Annexin V及PI均低染(Annexin V-PI-),分布在流式细胞分析图的左下区(LL);早期凋亡细胞Annexin V高染而PI低染(Annexin V+PI-),分布在图的右下区(RL);晚期凋亡或死亡细胞Annexin V及PI均高染(Annexin V+PI+),分布在图的右上区(RU)。将早期凋亡细胞百分数(RL)和晚期凋亡细胞百分数(RU)之和称为总凋亡率。AnnexinV/Pl流式细胞分析结果显示,TGF-β1组与正常对照组相比肝细胞早期凋亡率显著增加[(10.55±4.71)%vs(5.98±2.97)%,P<0.01),],总凋亡率亦显著增加[(19.94±3.68)%vs (13.27±4.62)%,P<0.05]。TUNEL法检测显示,细胞核中有棕黄色着染者为阳性细胞,细胞呈典型的凋亡形态学改变,即表现为变小、变圆、核固缩;而正常细胞的胞核不着染。每张切片在高倍视野下(×200)取5个视野,计数5个视野中每100个细胞中染色阳性的细胞数(%),取其平均数。经Iimage-Pro Plus图像分析软件处理,显示TGF-β1组与正常对照组相比肝细胞凋亡率显著增加[(30.25±6.43)%vs(4.75±0.96)%,P<0.01]。结论:AnnexinV/PI流式细胞分析法能灵敏、特异地检测早期凋亡细胞;TUNEL法能准确地反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征,可检测出极少量的凋亡细胞,灵敏度高,但只能标记中晚期凋亡细胞,两种方法相结合检测细胞凋亡更准确。