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目的：探究胆固醇对Hras12V转基因小鼠肝肿瘤发生发展的影响作用.
方法：采集8月龄C57BL/6J小鼠的正常肝组织(Wt)和Hras12V转基因小鼠的肝肿瘤组织(T)及其周围组织(P),HE染色进行病理学诊断,酶偶联比色法检测肝组织和血清中胆固醇的含量,蛋白质印迹法检测信号分子的表达和活化水平,RT-qPCR法检测基因的表达水平.胆固醇灌胃法处理Hras12V转基因小鼠,观察胆固醇对肝肿瘤发生发展的影响作用.
结果：Hras12V转基因在转基因小鼠P和T中第次显著增高.Hras12V小鼠肝肿瘤呈黄白色,HE染色显示肝肿瘤细胞大泡性脂肪变性,提示其脂质代谢紊乱.胆固醇检测结果表明,与Wt相比,Hras12V转基因小鼠的P和T中的胆固醇水平显著升高(p＜0.05),并且Hras12V转基因小鼠血清中的胆固醇含量也显著高于非转基因小鼠(p＜0.001).有趣的是,虽然T中Hras12V癌基因的表达显著高于P(p＜0.001),但T中的胆固醇水平却显著低于P(p＜0.01).胆固醇灌胃处理Hras12V转基因小鼠(4-8月龄)的实验结果表明,与对照组相比,胆固醇灌胃显著提升了小鼠血清和肝肿瘤中的胆固醇水平(p＜0.05).处理组的肝肿瘤总数以及肝结节(＜2mm)和肝腺瘤(2-5mm)的数量没有显著差别(p＞0.05),但肝癌(＞5mm)的数量却显著降低(p＜0.05).于此相一致,灌胃组小鼠的肝重和肝体重比显著降低(p＜0.05).RT-qPCR检测结果表明,对照组和灌胃组的血清白蛋白(Albumin)和Hras12V转基因的mRNA表达水平没有发生显著变化.蛋白质印迹法检测结果表明,与对照组T相比,灌胃组T中：含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase3,Caspase-3(35KDa))的蛋白水平明显降低,而cleaved-Caspase3(17KDa)的蛋白水平明显升高;B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl2)的蛋白表达水平明显降低;糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3beta,GSK-3β)、β-链蛋白(β-chain protein,β-Catenin)、磷酸化蛋白激酶(Phosphorylation extracellular regulated protein kinases,p-ERK)的蛋白表达水平没有发生明显变化.
结论：Ras癌基因在肝细胞的表达导致胆固醇在小鼠肝脏和血液中的蓄积,而过剩的胆固醇反过来抑制了肝肿瘤的发展而不是发生.